注册 登录  
 加关注
   显示下一条  |  关闭
温馨提示!由于新浪微博认证机制调整,您的新浪微博帐号绑定已过期,请重新绑定!立即重新绑定新浪微博》  |  关闭

hampc168

microorganism

 
 
 

日志

 
 

【转贴】API Candida 酵母菌鉴定系统  

2010-09-12 21:21:55|  分类: API鉴定系列 |  标签: |举报 |字号 订阅

  下载LOFTER 我的照片书  |

我没有用过这种板条,听蓝月说非常好(基本两个小时就可以看结果),所以先转一下说明书,然后再尝试吧!

API Candida 是一个在18-24小时内鉴定临床最常迂到酵母菌的标准化鉴定系统。能鉴定的菌名单列于本说明书末的鉴定表。

  API Candida 试验条是由能进行12个测定 (糖产酸或酶反应) 的10个含干粉底物小管所组成的。培养时,所产生的反应是由自然颜色变化所得。于35-37℃培养18或24小时之后,根据读表用肉眼观察反应锆果,可用所得数值谱或鉴定软件得到鉴定结果。


试剂

  一套API 20 A(可作25个鉴定物)包括有:

  - 25个API 20 A 试验条

  - 25个培养盒

  - 25个API 20 A 培养基物的安瓿管

  - 25份报告单

  - 1份说明书


附加产品

  -McFarland 标准(ref.70 000)点3范围

  -矿物油 (ref. 70 100)

  -吸管或PSI管 (ref. 70 250)

  -安瓿架 (ref. 70 200)

  -棉签 (ref. 70 610)

    -鉴定软件 (bioMerieux 有)

试验室必备设备

  -35-37℃培养箝

  -冰箱

  -本生煤气灯

  -记录笔


培养基成份

NaCl 0.85%

培养基 2 ml

NaCl

无菌离子水

8.5g

1000mL


培养基和试验条的贮存

  在有效日期(在包装上标出)内, 培养基和试验条应贮存于2-8℃。


警告与注意事项

  ·仅供体外诊断用。

  ·合格试验室检验人员应无菌操作,并防止带传染物。

  ·不能用口吸标本或试剂。

  ·不使用过期试剂。

  ·使用前,将试剂从冰箱中取出,使其达室温(20-30℃)。

  ·小心启开启安瓿瓶:

 

 

- 用手垂直握住安瓿瓶(白色瓶盖朝上)

-尽量将瓶盖压下

-用大姆指顶住瓶盖上斜面部分

-向外加压,使瓶盖内瓶断裂

·无滴头的安瓿

-小心取开瓶盖

·有滴头的安瓿瓶

  -垂直倒置安瓿

  -挤压瓶盖,将所有试剂倒入滴瓶

  ·所有接过接种的试验条应视为带传染性,作适当处置。

  ·所有患者标本和微生物培养物都是潜在的传染物,应按推荐的注意事项(NCCLSM29- A :Protection of Laboratory Workers from Instrument Biohazards and Infectious Diseases Transmitted by Blood, Body Fluids, and Tissue ;Approved Guideline-December 1997).

  ·完成测试、读和判断结果后,所有标本和接种过的试验条在丢弃之前,都需经高压天菌、烧烬或浸泡杀菌剂中。

  ·试验结果的判断应由合格的微生物家所作,同时应将病史、标本来源、菌落和显微形态考虑在内,如有可能,再作一些附加试验,尤其是抗生素敏感谱。


使用说明

  标本和酵母菌培养物应视为传染物,应由训练有素的合格检验师才能作适当的处置。

  无菌技术和对该研究菌群的操作,都应根据以下进行:”NCCLSM29-A, Protection of Laboratory Workers from Instrument Bioharazards and Infectious Diseases Transmitted by Blood, Body Fluids, and Tissue Approved Guidelines- December 1997”..

  附加操作注意点,参照微生物和生物医学试验室生物安全手册,HHS publication No. (CDC) 93-8395,3rd Edition (May,1993) 或本地规定。

菌落选择

  ·在显微镜下观察所研究的菌株确实是酵母。

  ·用API Candida 试验条前,用以下培养基得到的菌落:

   -Sabouraud 琼脂(加或不加抗生素);

   - Albicans ID 琼脂;

   -血琼脂;

   -如用其它培养基分离菌落,则还需用以上任一种培养基转接一次。


试验条准备

  ·准备一个培养盒(盘和盖),注入5ml水[无离子水或蒸馏水,或不含任何化学物质、气体(如Cl2、CO2,等)]到盒的蜂窝状凹室中,以创造湿室。

  ·记录菌株资料于盘的边缘部分。

  ·从包装内取出试验条。

  ·从包装中取出试验条,放置培养盒内。

  ·弃去干燥剂。


接种的准备

  ·按“警告和注意事项”所示。打开一个含0.85 % NaCl (2 ml)培养基的安瓿。

  ·用吸管或棉签挑取一个或几个分得很开、一致的菌落制成菌悬液,其浊度用光密度测量相当于3 McFarland。

  ·摇匀酵母悬液。

  注:悬液制备后,应立即使用。


试验条的接种

  ·分别将已准备好的酵母悬液只加到管内,避免产生气泡(培养盒稍向前倾斜,用吸管或PSI 管沿杯边加入)。

  ·接种试验条后,立即将矿物油覆盖前5个测定(GLU到RAF ) 和最后一个测定(URE) 。

  注:加量十分重要,过多过少都会造成假阳性和假阴性。

  ·盖上培养盒。

  ·于35-370C好氧条件下,培养18-24小时。


读试验条

  培养18-24小时后:参照本说明书的读表读反应结果,并以“+”或“-”记录于结果报告单上。

  警告:管8和管9是双功能的,能在同一个管内进行2个反应;

   -管8 :βXYL (第8个测定 ) / βNAG (第11个测定)

   -管9 :βGUR (第9个测定 ) / βGAL (第12个测定 )


解释

  ·所得的反应编成数字谱:在报告单上,以3个测定为一组,数字以1、2 和4标明。在每组中,每个相应的阳性反应数字相加,得出一个4位数字图谱。

  ·鉴定可用搜索说明书的所列数字谱或用鉴定软件手工输入4位数图谱。如果在几个种间的识别力很低的话,还需用补充试验区分它们。这些试验结果取自文献(或ID 32 C 数据库)。

 

废物处理
  所有安瓿、棉签、吸管、试验条和培养盒使用后,在处理之前必需高压灭菌、焚烧或浸于杀菌剂。

局限性(应用范围)
  API Candida 系统只能用于数据库中包括的(见说明书末的鉴定表),例如归属于假丝酵母属(Candida)、 隐球酵母属(Cryptococcus)、地霉菌属(Geotrichum)、酵母菌属(Sacchromyces)和丝孢酵母属(Trichosporon)的种。不能用于除这些之外的其它菌。

质量控制
  培养基和试验条在有效期内不同阶段需作系统的质量控制,对自愿作质控者,推荐以下培养物:
 

  ATCC :American Type Culture Collection ,12301 Parklawn Drive, Rockville,Maryland 20852, USA.

  菌株培养在Sabouraud 琼脂后所得的数字谱。

  蕈状丝孢酵母Trichosporon mycoides 用API Candida 鉴定为Trichosporon spp. 1


读表

测定 反应 结果
阴性 阳性

1)GLU

2)GAL

3)SAC

4)TRE

5)RAF

葡萄糖 (产酸)

半乳糖 (产酸)

蔗糖 (产酸)

海藻糖(产酸)

棉子糖(产酸)

紫色

灰白色一紫色

黄色

绿色 / 灰白色
6) βMAL β-麦芽糖甙酶 无色 色浅黄一鲜黄色
7) αAMY α-淀粉酶 无色 色浅黄一鲜黄色
8) βXYL

β-木糖甙酶

无色一极浅黄色/

   兰色/ 绿色**

浅黄一鲜黄色

9) βGUR β-葡糖甙酸酶 无色/兰色/绿色 浅黄一鲜黄色
10) URE 脲酶 黄色一浅橙色 红色
11)βNAG(在第8管中)* N-乙酰-β-葡萄糖胺酶 无色 / 黄色 兰色 / 绿色**
12)βGAL(在第9管中)* β-半乳糖甙酶 无色 / 黄色 兰色 / 绿色

  *第8与第9管是双功能:第8管:βXYL (第8个测定) / βNAG(第11个测定)

  第9管:βGUR (第9个测定) / βGAL (第12个测定)

  **在杯8中少有绿色 = βXYL(-) βNAG (+)


参考文献

  1.BARNETT J.A., PAYNE R.W., YARROWD.Yeasts : Characteristics and Identification.(1990) Cambridge    University Press, London.

  2.KREGER VAN RIJ N.J.W.The yeasts : A Taxonomic Study.(1984) Elsevier, Amsterdam.

  3.LARONE D.H. Medically Important Fungi. A Guide to Identification.Third Edition.(1995) American    Society for Microbiology, Washington, D.C.

  4.McGINNIS M.R. and al.Taxonomic and Nomenclatural Evaluation of the genera Candida and Torulopsis.

   (1984) J.Clin. Microbiol., 20, 813-814.

  5.MONGET D., DUCHESNE M.A., CANIAUX I.Api Candida, A New Identification System for Yeasts.(1995)    7th E.C.C.M.I.D., Vienna, 26-30 March 1995.

  6.WARREN N.G., HAZEN K.C.Candida, Cryptococcus, and Other Yeasts of Medical Importance in Manual of    Clinical Microbiology, Washington, D.C.

  评论这张
 
阅读(480)| 评论(0)
推荐 转载

历史上的今天

评论

<#--最新日志,群博日志--> <#--推荐日志--> <#--引用记录--> <#--博主推荐--> <#--随机阅读--> <#--首页推荐--> <#--历史上的今天--> <#--被推荐日志--> <#--上一篇,下一篇--> <#-- 热度 --> <#-- 网易新闻广告 --> <#--右边模块结构--> <#--评论模块结构--> <#--引用模块结构--> <#--博主发起的投票-->
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

页脚

网易公司版权所有 ©1997-2017