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【转贴】API Candida 酵母菌鉴定系统

2010-09-12 21:21:55| 分类： API鉴定系列 | 标签： |举报 |字号大中小订阅

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我没有用过这种板条，听蓝月说非常好（基本两个小时就可以看结果），所以先转一下说明书，然后再尝试吧！

API Candida 是一个在18-24小时内鉴定临床最常迂到酵母菌的标准化鉴定系统。能鉴定的菌名单列于本说明书末的鉴定表。

　　API Candida 试验条是由能进行12个测定 (糖产酸或酶反应) 的10个含干粉底物小管所组成的。培养时，所产生的反应是由自然颜色变化所得。于35-37℃培养18或24小时之后，根据读表用肉眼观察反应锆果，可用所得数值谱或鉴定软件得到鉴定结果。

试剂

　　一套API 20 A(可作25个鉴定物)包括有：

　　-　25个API 20 A 试验条

　　- 25个培养盒

　　- 25个API 20 A 培养基物的安瓿管

　　- 25份报告单

　　- 1份说明书

附加产品

　　-McFarland 标准(ref.70 000)点3范围

　　-矿物油 (ref. 70 100)

　　-吸管或PSI管 (ref. 70 250)

　　-安瓿架 (ref. 70 200)

　　-棉签 (ref. 70 610)

　　　　-鉴定软件 (bioMerieux 有)

试验室必备设备

　　-35-37℃培养箝

　　-冰箱

　　-本生煤气灯

　　-记录笔

培养基成份

NaCl 0.85%

培养基 2 ml

NaCl

无菌离子水

8.5g

1000mL

培养基和试验条的贮存

　　在有效日期(在包装上标出)内, 培养基和试验条应贮存于2-8℃。

警告与注意事项

　　·仅供体外诊断用。

　　·合格试验室检验人员应无菌操作，并防止带传染物。

　　·不能用口吸标本或试剂。

　　·不使用过期试剂。

　　·使用前，将试剂从冰箱中取出，使其达室温(20-30℃)。

　　·小心启开启安瓿瓶：

- 用手垂直握住安瓿瓶(白色瓶盖朝上)

-尽量将瓶盖压下

-用大姆指顶住瓶盖上斜面部分

-向外加压，使瓶盖内瓶断裂

·无滴头的安瓿

-小心取开瓶盖

·有滴头的安瓿瓶

　　-垂直倒置安瓿

　　-挤压瓶盖，将所有试剂倒入滴瓶

　　·所有接过接种的试验条应视为带传染性，作适当处置。

　　·所有患者标本和微生物培养物都是潜在的传染物，应按推荐的注意事项(NCCLSM29- A :Protection of Laboratory Workers from Instrument Biohazards and Infectious Diseases Transmitted by Blood, Body Fluids, and Tissue ;Approved Guideline-December 1997).

　　·完成测试、读和判断结果后，所有标本和接种过的试验条在丢弃之前，都需经高压天菌、烧烬或浸泡杀菌剂中。

　　·试验结果的判断应由合格的微生物家所作，同时应将病史、标本来源、菌落和显微形态考虑在内，如有可能，再作一些附加试验，尤其是抗生素敏感谱。

使用说明

　　标本和酵母菌培养物应视为传染物，应由训练有素的合格检验师才能作适当的处置。

　　无菌技术和对该研究菌群的操作，都应根据以下进行：”NCCLSM29-A, Protection of Laboratory Workers from Instrument Bioharazards and Infectious Diseases Transmitted by Blood, Body Fluids, and Tissue Approved Guidelines- December 1997”..

　　附加操作注意点，参照微生物和生物医学试验室生物安全手册，HHS publication No. (CDC) 93-8395,3rd Edition (May,1993) 或本地规定。

菌落选择

　　·在显微镜下观察所研究的菌株确实是酵母。

　　·用API Candida 试验条前，用以下培养基得到的菌落：

　　　-Sabouraud 琼脂(加或不加抗生素);

　　　- Albicans ID 琼脂；

　　　-血琼脂；

　　　-如用其它培养基分离菌落，则还需用以上任一种培养基转接一次。

试验条准备

　　·准备一个培养盒(盘和盖)，注入5ml水[无离子水或蒸馏水，或不含任何化学物质、气体(如Cl2、CO2，等)]到盒的蜂窝状凹室中，以创造湿室。

　　·记录菌株资料于盘的边缘部分。

　　·从包装内取出试验条。

　　·从包装中取出试验条，放置培养盒内。

　　·弃去干燥剂。

接种的准备

　　·按“警告和注意事项”所示。打开一个含0.85 % NaCl (2 ml)培养基的安瓿。

　　·用吸管或棉签挑取一个或几个分得很开、一致的菌落制成菌悬液，其浊度用光密度测量相当于3 McFarland。

　　·摇匀酵母悬液。

　　注：悬液制备后，应立即使用。

试验条的接种

　　·分别将已准备好的酵母悬液只加到管内，避免产生气泡(培养盒稍向前倾斜，用吸管或PSI 管沿杯边加入)。

　　·接种试验条后，立即将矿物油覆盖前5个测定(GLU到RAF ) 和最后一个测定(URE) 。

　　注：加量十分重要，过多过少都会造成假阳性和假阴性。

　　·盖上培养盒。

　　·于35-370C好氧条件下，培养18-24小时。

读试验条

　　培养18-24小时后：参照本说明书的读表读反应结果，并以“+”或“-”记录于结果报告单上。

　　警告：管8和管9是双功能的，能在同一个管内进行2个反应；

　　　-管8 ：βXYL (第8个测定 ) / βNAG (第11个测定)

　　　-管9 ：βGUR (第9个测定 ) / βGAL (第12个测定 )

解释

　　·所得的反应编成数字谱：在报告单上，以3个测定为一组，数字以1、2 和4标明。在每组中，每个相应的阳性反应数字相加，得出一个4位数字图谱。

　　·鉴定可用搜索说明书的所列数字谱或用鉴定软件手工输入4位数图谱。如果在几个种间的识别力很低的话，还需用补充试验区分它们。这些试验结果取自文献(或ID 32 C 数据库)。

废物处理

　　所有安瓿、棉签、吸管、试验条和培养盒使用后，在处理之前必需高压灭菌、焚烧或浸于杀菌剂。

局限性(应用范围)

　　API Candida 系统只能用于数据库中包括的(见说明书末的鉴定表)，例如归属于假丝酵母属(Candida)、隐球酵母属(Cryptococcus)、地霉菌属(Geotrichum)、酵母菌属(Sacchromyces)和丝孢酵母属(Trichosporon)的种。不能用于除这些之外的其它菌。

质量控制

　　培养基和试验条在有效期内不同阶段需作系统的质量控制，对自愿作质控者，推荐以下培养物：

　　ATCC ：American Type Culture Collection ,12301 Parklawn Drive, Rockville,Maryland 20852, USA.

　　菌株培养在Sabouraud 琼脂后所得的数字谱。

　　蕈状丝孢酵母Trichosporon mycoides 用API Candida 鉴定为Trichosporon spp. 1

读表

测定	反应	结果
测定	反应	阴性	阳性
1）GLU 2）GAL 3）SAC 4）TRE 5）RAF	葡萄糖 (产酸) 半乳糖 (产酸) 蔗糖 (产酸) 海藻糖(产酸) 棉子糖(产酸)	紫色灰白色一紫色	黄色绿色 / 灰白色
6） βMAL	β-麦芽糖甙酶	无色	色浅黄一鲜黄色
7） αAMY	α-淀粉酶	无色	色浅黄一鲜黄色
8） βXYL	β-木糖甙酶	无色一极浅黄色/ 　　　兰色/ 绿色**	浅黄一鲜黄色
９） βGUR	β-葡糖甙酸酶	无色/兰色/绿色	浅黄一鲜黄色
１０） URE	脲酶	黄色一浅橙色	红色
１１）βNAG(在第8管中)*	N-乙酰-β-葡萄糖胺酶	无色 / 黄色	兰色 / 绿色**
１２）βGAL(在第9管中)*	β-半乳糖甙酶	无色 / 黄色	兰色 / 绿色

　　*第8与第9管是双功能：第8管：βXYL (第8个测定) / βNAG(第11个测定)

　　第9管：βGUR (第9个测定) / βGAL (第12个测定)

　　**在杯8中少有绿色 = βXYL(-) βNAG (+)

参考文献

　　1.BARNETT J.A., PAYNE R.W., YARROWD.Yeasts : Characteristics and Identification.(1990) Cambridge 　　　University Press, London.

　　2.KREGER VAN RIJ N.J.W.The yeasts : A Taxonomic Study.(1984) Elsevier, Amsterdam.

　　3.LARONE D.H.　Medically Important Fungi. A Guide to Identification.Third Edition.(1995) American 　　　Society for Microbiology, Washington, D.C.

　　4.McGINNIS M.R. and al.Taxonomic and Nomenclatural Evaluation of the genera Candida and Torulopsis.

　　　(1984) J.Clin. Microbiol., 20, 813-814.

　　5.MONGET D., DUCHESNE M.A., CANIAUX I.Api Candida, A New Identification System for Yeasts.(1995) 　　　7th E.C.C.M.I.D., Vienna, 26-30 March 1995.

　　6.WARREN N.G., HAZEN K.C.Candida, Cryptococcus, and Other Yeasts of Medical Importance in Manual of 　　　Clinical Microbiology, Washington, D.C.

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