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日志

 
 

【转贴】ID 32 STAPH 葡萄球菌的鉴定系统  

2010-09-12 20:51:41|  分类: API鉴定系列 |  标签: |举报 |字号 订阅

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 ID 32 STAPH是由标准化、微量化的生化试验和相应数据库组成的用于鉴定葡萄球菌属、微球菌属、口腔球菌属和气球菌属的鉴定系统。本系统能鉴定的所有细菌列表于使用说明后的菌名表。读取结果和判定鉴定结果即可自动化进行也可人工进行。  

原理 

ID 32 STAPH鉴定试条包括32个小孔,其中26孔是鉴定孔,每孔含有一种脱水底物。

培养24小时后用ATB Express仪或微型API仪读取反应结果,或人工读取反应结果。

通过鉴定软件的判断分析得到鉴定结果。 

试剂 

一个ID 32 C试剂盒包括:

-   25条ID 32 STAPH鉴定试条;

-   25个培养用的盒子;

-   25份结果报告单;

-   1份使用说明。 

另需以下产品(不包括在试剂盒内): 

悬浮液2ml(#70 700)或3ml(#70 640)(如用ATB接种器);

试剂:VP试剂A(#70 570)和VP试剂B(#70 580);

NIT试剂1(#70 440)和NIT试剂2(#70 450);

FB试剂(#70 560);

-   石蜡油(#70 100);

-   ATB电子加样器(#99 040)或接种器(#15 740)和Tip头(#15 710);

-   浊度仪:浊度计(#99 234)或ATB浊度仪或麦氏标准浊度管(#7090 0);

-   ATB Express仪或微型API仪及其鉴定软件;

-   安瓿管架(#70 200)。

-   密封罐 

需配备的实验室设备: 

-   37℃培养箱

-   冰箱

-   本生灯或酒精灯

-   记号笔。

 

培养基和试剂的成份

 

悬浮液  2ml或3ml

蒸馏水

VP A试剂 5ml

 

KOH                              20g

蒸馏水                         100ml

腐蚀性

R35:致严重灼伤。

S2:放在小孩接触不到的地方。

S26:假如进入眼睛,立即用充足的水冲洗并找医生。

S27:立即脱下所有污染的衣服。

S37/S39:戴上适合的手套,保护眼、脸。

VP B试剂 5ml

 

α-萘酚                          12g

有机溶剂                      100ml

        毒性

R60:可致不孕。

R61:对胎儿有危害。

R10:易燃。

R20/21/22:吸入、接触皮肤、吞咽均有害。

S53:避免暴露试剂。(避免接触皮肤和眼睛,雾化吸入,和过热)。

S45:如感不适,请立即找医师。

NIT试剂1  5ml

 

对氨基苯磺酸                0.4g

乙酸                             30g

蒸馏水                         70ml

腐蚀性

R34:致灼伤。

S2:放在小孩接触不到的地方。

S23:不要吸入试剂蒸气。

S26:假如进入眼睛,立即用充足的水冲洗并找医生。

NIT试剂2  5ml

 

 

N-N-甲基-1-萘胺            0.6g

乙酸                             30g

蒸馏水                         70ml

       腐蚀性

R34:致灼伤。

S2:放在小孩接触不到的地方。

S23:不要吸入试剂蒸气。

S26:假如进入眼睛,立即用充足的水冲洗并找医生。

FB试剂  5ml

 

 

坚牢兰BB(>0.1%)   0.35g

12-烷基-硫酸钠               7.5g

有机溶剂                      100ml

             毒性

R61:对胎儿有危害。

R20/21/22:吸入、接触皮肤、吞咽均有害。

R36:刺激眼睛。

S53:避免暴露试剂。(避免接触皮肤和眼睛,雾化吸入,和过热)

S45:如感不适,请立即找医师。

 

警告及注意:

 

?   仅用于体外诊断

?   实验技术人员需进行无菌操作并且警惕病原菌的传染。

?   不要用嘴通过吸管吸取样本或试剂。

?   不要使用过期试剂。

?   置冰箱试剂使用之前应放至室温(20 ~30℃)。

?按以下方法小心打开安瓿管

 

 

 

-  盖上安瓿开启器。

-  用手垂直握住安瓿瓶(白色瓶盖朝上)。

-  尽量将瓶盖压下。

-  用大姆指顶住瓶盖上斜面部分。

-  向外加压,使瓶盖内瓶尖断裂。

-  取出安瓿开启器备用。

*  无滴头的安瓿

-  小心取开瓶盖

*  有滴头的安瓿瓶

-  垂直倒置安瓿

-        挤压瓶盖,将所有试剂倒入滴瓶

?   所有接种物均需认作具有传染性,应适当处理。

?   所有病人标本和微生物培养物均是潜在的传染体, 并根据1993年 NCCLS M29-T2:CDC《微生物学和生物医学实验室的生物安全手册 》预防污染。

?   在完成实验,读取和判定结果后,所有的标本、溢出物和培养物品均须高压灭菌,经杀菌剂浸泡或烧毁。

结果的解释应由了解病人的病史、标本来源、菌落特征及显微镜形态学特征的微生物专家的进行,若有需要应结合抗生素敏感情况。

 

试验条的贮存

 

ID 32 STAPH鉴定试条、NIT试剂2,VP试剂B和FB试剂2-8℃保存,包装袋上标有有效日期。

VP试剂A和NIT试剂1可在室温存放(2-30℃)。

打开安瓿将试剂倒入滴管瓶后,试剂的有效期为一个月。试剂开启后立即倒入滴瓶,并在瓶身记录开启日期。

FB试剂对光敏感,应用铝箔包住瓶子,用时才拿出冰箱,不要在外放置时间过长。

FB试剂一变黑褐色,应立即弃用。

 

试剂的使用

 

使用前应将试剂置室温(20 ~30℃)。

1.                VP A,VP B,NIT 1和NIT 2试剂:

?            -按“注意事项”指南打开装有试剂的安瓿(有滴嘴帽)。

?            -滴一滴试剂。

?            -用完后小心盖好瓶盖,按“试剂保存”指南保存试剂。


2.  FB 试剂:

?   按“注意事项”指南打开装有试剂的安瓿(无滴嘴帽)。

?   用干燥吸管吸取安瓿管中的试剂放入滴瓶中(含有脱水底物的活化成分)。

?   把滴头装好。

?   小心盖紧滴瓶。

?   振摇。

?   等5分钟至活化成分完全溶解。

?   使用这个重新配好的试剂,小心盖好滴瓶,按“试剂保存”指南保存试剂。

 

使用说明

 

?   标本和细菌培养物均应当作传染体,并由受过训练、有经验的技师做适当处理。

?   无菌操作和对细菌的防备措施均应按严格的操作程序进行;防备措施参考:(NCCLS M29-T2,第2版,试行指南:防止实验人员通过血液、体液、和组织感染传染性疾病的保护措施)

?   附加的预防措施,参考《微生物学和生物医学实验室的生物安全手册》 (CDC 93-8395,第3版,1993年5月)或各国的规程。

 

菌落的选择

 

从血平板、P琼脂平板、高盐甘露醇平板和麦康凯培养基上挑取单个菌落。

注:麦康凯培养基可以使用,但不是很适于葡萄球菌和微球菌的生长(如果培养基含有龙胆紫时,某些菌属的生长被抑制)。

 

鉴定试条的准备

 

?   从包装袋中取出鉴定试条;

?   去掉干燥剂;

?   盖上鉴定试条的盖子;

?   在鉴定试条伸出的边沿处记录菌株信息。

 

接种液的准备

 

?   按“注意事项”指南打开一支装有2ml悬浮液(如用ATB接种器则3m1)的安瓿(无滴管盖)或用一支装有无菌蒸馏水的试管。

?   挑取几个形态一致的单个菌落,制成菌悬液,用浊度仪或与麦氏标准比浊管比较将浊度调整到0.5麦氏单位。

注:如果自动读取鉴定试条的结果,必须用浊度仪调整菌悬液的浊度。

  


接种

 

自动接种:

?   分别将鉴定试条,装有菌悬液的安瓿和Tip头装在ATB接种器的架子上。

?   接种器自动混匀安瓿中菌悬液,分加在各孔中加入55ml。

手工接种:

?   混匀安瓿中的菌悬液,然后用ATB电子加样器在各孔中加入55ml 。

?   在URE,ADH和ODC孔(1.0,1.1,1.2)中各加2滴石蜡油。

?   盖上鉴定试条的盖子。

?   好氧条件下37℃培养24小时。

注:一些通气式培养箱会引起小孔中的培养基完全脱水。遇此情况,可将鉴定试条放在一个盛有少量水的密封罐中,形成潮湿环境避免培养基干燥。

 

读取结果

 

观察0行的反应:

?   NIT试验(0.0孔):分别加一滴NIT试剂1和NIT试剂2。

?   VP试验(0.1孔):分别加一滴VP试剂A和VP试剂B;

?   ΒGAL、ArgA、PAL和PyrA试验(0.2-0.5孔):各加一滴FB试剂;

?   5分钟后观察结果(不要超过10分钟)。

?   自动读取结果:

?   使用ATB Express 仪或微型API仪。阅读器会记录每孔的颜色,并将数据输入计算机。

?   人工读取结果:

?   根据结果判定要点,在记录单上记下结果。

 

鉴定

 

?   自动读取结果后:

   -计算机通过鉴定软件的分析得到鉴定结果。

?   人工读取结果后:

   -转换成数字编码,然后与鉴定编码索引比较得到鉴定结果。

结果报告单上每三个试验划为一组,每组中的试验如阳性分别值1,2,4(如阴性则为0),然后将各组中3个试验得值相加。得到一组9位数的编码,前4位数是(1.0-1.B)的值,接着4位数是(0.0-0.B)的值,第9位数是补充试验:RIB,CEL(1.C,1.D)的值。将这组9位数编码输入计算机,通过鉴定软件得鉴定结果。

 

2661 2461 0 溶血葡萄球菌




 

质量控制

 

生产厂家已对不同保存时期的鉴定试条进行了系统的质控检查,对于希望进行质控的试验者建议使用以下菌株:

 

URE

ADH

ODC

ESC

GLU

FRU

MNE

MAL

LAC

TRE

MAN

RAF

RIB

CEL

NIT

VP

bGAL

ArgA

PAL

PyrA

NOVO

SAC

NAG

TUR

ARA

bGUR

1.

V

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

2.

+

+

3.

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

V

+

+

+

+

+

+

4.

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

1.  吕克杜纳西葡萄球菌 (Staphylococcus lugdunensis)          ATCC 49576 

2.  滕黄微球菌(Micrococcus luteus)                                      ATCC 7468

3.  鸡葡萄球菌(Staphylococcus gallinarum)                       ATCC 700401

4.  猪葡萄球菌(Staphylococcus hyicus)                            ATCC 1

ATCC : American Type Culture Collection, 10801 University Boulevard, Manassas, VA 20110-2209, USA.




废弃物的处理

 

所有使用过的安瓿、鉴定试条、Tip头都要经过高压灭菌、焚烧或经消毒剂浸泡处理后再丢弃。

 

范围

 

ID 32 STAPH系统仅限于鉴定包括在数据库中的菌属(见使用说明后的菌名表),不能用于鉴定其它的微生物或排除它们的存在。

  

建议

 

使用ID 32 STAPH鉴定试条时为得到准确结果应注意以下几点:

?   根据使用手册使用推荐的培养基(P培养基或血平板);

?   调整菌悬液浊度在0.5麦氏单位(如果用ATB Express仪或微型API仪读取结果,须用浊度计检测);

?   用ATB电子加样器或接种器准确分加55ml于每孔中(尤其在自动读取结果时);

?   注意培养时间(24小时)和读取结果时间(滴加试剂后5-1 0分钟,除VP试验外);

选用合格的指示剂,注意有效日期和保存条件。安瓿打开后超过一个月不要再使用。



生化反应表

 


孔号

简  称

中  文 / 反应底物

结    果

阴  性

阳  性

1.0

URE

脲酶

黄/浅橙黄

粉红/紫

1.1

1.2

ADH

ODC

精氨酸双水解酶

鸟氨酸脱羧酶

红/橙

1.3

ESC

七叶灵(Hydrolysis)

无色/浅灰色

啡/黑

1.4

GLU

葡萄糖

 

 

1.5

FRU

果糖

 

 

1.6

MNE

甘露糖

 

 

1.7

MAL

麦芽糖

 

 

1.8

LAC

乳糖(Fermentation)

1.9

TRE

海藻糖

红/橙

黄/橙

1.A

MAN

甘露醇

 

 

1.B

RAF

棉子糖

 

 

1.C

RIB

D-核糖

 

 

1.D

CEL

纤维二糖

 

 

1.E

1.F

 

Empty cupules

 

 

 

 

 

NIT 1 + NIT 2 / 5 分钟 < 10 分钟

0.0

NIT

硝酸盐还原(Reduction)

无色

粉红/紫

 

 

 

VP A + VP B / 10分钟< 12分钟

0.1

VP

丙酮酸盐

无色

粉红/红

 

 

 

FB / 5分钟< 10分钟(?GAL à PyrA)


0.2


bGAL


b-半乳糖甙酶

无色
浅紫
浅橙


0.3

ArgA

L-精氨酸芳酰胺酶

无色
浅橙


0.4


PAL


L-天冬氨酸芳酰胺酶芳酰胺酶

无色
浅紫
浅橙


0.5

PyrA

吡咯酮烷芳酰胺酶

无色
浅橙

0.6

NOVO

新生霉素

红/橙

黄/橙

0.7

SAC

蔗糖(Fermentation)

0.8

NAG

N—乙酰 葡萄糖甙酶(Fermentation)

0.9

TUR

图拉糖

0.A

ARA

L-阿拉伯糖(Fermentation)

0.B

bGUR

b-D-葡萄糖醛酸盐

无色

0.C

 

Empty cupules

 

 

0.D

 

 

 

0.E

 

 

 

0.F

 

 

 

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