原理
ID 32 STAPH鉴定试条包括32个小孔，其中26孔是鉴定孔，每孔含有一种脱水底物。
培养24小时后用ATB Express仪或微型API仪读取反应结果,或人工读取反应结果。
通过鉴定软件的判断分析得到鉴定结果。
试剂
一个ID 32 C试剂盒包括：
- 25条ID 32 STAPH鉴定试条；
- 25个培养用的盒子；
- 25份结果报告单；
- 1份使用说明。
另需以下产品（不包括在试剂盒内）：
悬浮液2ml(＃70 700)或3ml(#70 640)(如用ATB接种器)；
试剂：VP试剂A(#70 570)和VP试剂B(#70 580)；
NIT试剂1(#70 440)和NIT试剂2(#70 450)；
FB试剂(#70 560)；
- 石蜡油(#70 100)；
- ATB电子加样器(#99 040)或接种器(#15 740)和Tip头(#15 710)；
- 浊度仪：浊度计(＃99 234)或ATB浊度仪或麦氏标准浊度管(#7090 0)；
- ATB Express仪或微型API仪及其鉴定软件；
- 安瓿管架(#70 200)。
- 密封罐
需配备的实验室设备：
- 37℃培养箱
- 冰箱
- 本生灯或酒精灯
- 记号笔。
培养基和试剂的成份
| 悬浮液 2ml或3ml | 蒸馏水 |
| VP A试剂 5ml
| KOH 20g 蒸馏水 100ml 腐蚀性 R35：致严重灼伤。 S2：放在小孩接触不到的地方。 S26：假如进入眼睛，立即用充足的水冲洗并找医生。 S27：立即脱下所有污染的衣服。 S37/S39：戴上适合的手套，保护眼、脸。 |
| VP B试剂 5ml
| α-萘酚 12g 有机溶剂 100ml 毒性 R60：可致不孕。 R61：对胎儿有危害。 R10：易燃。 R20/21/22：吸入、接触皮肤、吞咽均有害。 S53：避免暴露试剂。（避免接触皮肤和眼睛，雾化吸入，和过热）。 S45：如感不适，请立即找医师。 |
| NIT试剂1 5ml
| 对氨基苯磺酸 0.4g 乙酸 30g 蒸馏水 70ml 腐蚀性 R34：致灼伤。 S2：放在小孩接触不到的地方。 S23：不要吸入试剂蒸气。 S26：假如进入眼睛，立即用充足的水冲洗并找医生。 |
| NIT试剂2 5ml
| N-N-甲基-1-萘胺 0.6g 乙酸 30g 蒸馏水 70ml 腐蚀性 R34：致灼伤。 S2：放在小孩接触不到的地方。 S23：不要吸入试剂蒸气。 S26：假如进入眼睛，立即用充足的水冲洗并找医生。 |
| FB试剂 5ml
| 坚牢兰BB（＞0.1%） 0.35g 12-烷基-硫酸钠 7.5g 有机溶剂 100ml 毒性 R61：对胎儿有危害。 R20/21/22：吸入、接触皮肤、吞咽均有害。 R36：刺激眼睛。 S53：避免暴露试剂。（避免接触皮肤和眼睛，雾化吸入，和过热） S45：如感不适，请立即找医师。 |
警告及注意：
? 仅用于体外诊断
? 实验技术人员需进行无菌操作并且警惕病原菌的传染。
? 不要用嘴通过吸管吸取样本或试剂。
? 不要使用过期试剂。
? 置冰箱试剂使用之前应放至室温（20 ～30℃）。
?按以下方法小心打开安瓿管
|
| - 盖上安瓿开启器。 - 用手垂直握住安瓿瓶(白色瓶盖朝上)。 - 尽量将瓶盖压下。 - 用大姆指顶住瓶盖上斜面部分。 - 向外加压，使瓶盖内瓶尖断裂。 - 取出安瓿开启器备用。 * 无滴头的安瓿 - 小心取开瓶盖 * 有滴头的安瓿瓶 - 垂直倒置安瓿 - 挤压瓶盖，将所有试剂倒入滴瓶 |
? 所有接种物均需认作具有传染性，应适当处理。
? 所有病人标本和微生物培养物均是潜在的传染体， 并根据1993年 NCCLS M29-T2:CDC《微生物学和生物医学实验室的生物安全手册 》预防污染。
? 在完成实验,读取和判定结果后，所有的标本、溢出物和培养物品均须高压灭菌，经杀菌剂浸泡或烧毁。
结果的解释应由了解病人的病史、标本来源、菌落特征及显微镜形态学特征的微生物专家的进行，若有需要应结合抗生素敏感情况。
试验条的贮存
ID 32 STAPH鉴定试条、NIT试剂2，VP试剂B和FB试剂2-8℃保存，包装袋上标有有效日期。
VP试剂A和NIT试剂1可在室温存放(2-30℃)。
打开安瓿将试剂倒入滴管瓶后，试剂的有效期为一个月。试剂开启后立即倒入滴瓶，并在瓶身记录开启日期。
FB试剂对光敏感，应用铝箔包住瓶子，用时才拿出冰箱，不要在外放置时间过长。
FB试剂一变黑褐色，应立即弃用。
试剂的使用
使用前应将试剂置室温（20 ～30℃）。
1． VP A，VP B，NIT 1和NIT 2试剂：
? －按“注意事项”指南打开装有试剂的安瓿(有滴嘴帽)。
? －滴一滴试剂。
? －用完后小心盖好瓶盖，按“试剂保存”指南保存试剂。
2． FB 试剂：
? 按“注意事项”指南打开装有试剂的安瓿(无滴嘴帽)。
? 用干燥吸管吸取安瓿管中的试剂放入滴瓶中(含有脱水底物的活化成分)。
? 把滴头装好。
? 小心盖紧滴瓶。
? 振摇。
? 等5分钟至活化成分完全溶解。
? 使用这个重新配好的试剂，小心盖好滴瓶，按“试剂保存”指南保存试剂。
使用说明
? 标本和细菌培养物均应当作传染体，并由受过训练、有经验的技师做适当处理。
? 无菌操作和对细菌的防备措施均应按严格的操作程序进行；防备措施参考：（NCCLS M29-T2，第2版，试行指南：防止实验人员通过血液、体液、和组织感染传染性疾病的保护措施）
? 附加的预防措施，参考《微生物学和生物医学实验室的生物安全手册》 （CDC 93-8395，第3版，1993年5月）或各国的规程。
菌落的选择
从血平板、P琼脂平板、高盐甘露醇平板和麦康凯培养基上挑取单个菌落。
注：麦康凯培养基可以使用，但不是很适于葡萄球菌和微球菌的生长（如果培养基含有龙胆紫时，某些菌属的生长被抑制）。
鉴定试条的准备
? 从包装袋中取出鉴定试条；
? 去掉干燥剂；
? 盖上鉴定试条的盖子；
? 在鉴定试条伸出的边沿处记录菌株信息。
接种液的准备
? 按“注意事项”指南打开一支装有2ml悬浮液(如用ATB接种器则3m1)的安瓿(无滴管盖)或用一支装有无菌蒸馏水的试管。
? 挑取几个形态一致的单个菌落，制成菌悬液，用浊度仪或与麦氏标准比浊管比较将浊度调整到0.5麦氏单位。
注：如果自动读取鉴定试条的结果，必须用浊度仪调整菌悬液的浊度。
接种
自动接种：
? 分别将鉴定试条，装有菌悬液的安瓿和Tip头装在ATB接种器的架子上。
? 接种器自动混匀安瓿中菌悬液，分加在各孔中加入55ml。
手工接种：
? 混匀安瓿中的菌悬液，然后用ATB电子加样器在各孔中加入55ml 。
? 在URE，ADH和ODC孔（1.0，1.1，1.2）中各加2滴石蜡油。
? 盖上鉴定试条的盖子。
? 好氧条件下37℃培养24小时。
注：一些通气式培养箱会引起小孔中的培养基完全脱水。遇此情况，可将鉴定试条放在一个盛有少量水的密封罐中，形成潮湿环境避免培养基干燥。
读取结果
观察0行的反应：
? NIT试验(0.0孔)：分别加一滴NIT试剂1和NIT试剂2。
? VP试验(0.1孔)：分别加一滴VP试剂A和VP试剂B；
? ΒGAL、ArgA、PAL和PyrA试验(0.2-0.5孔)：各加一滴FB试剂；
? 5分钟后观察结果(不要超过10分钟)。
? 自动读取结果：
? 使用ATB Express 仪或微型API仪。阅读器会记录每孔的颜色，并将数据输入计算机。
? 人工读取结果：
? 根据结果判定要点，在记录单上记下结果。
鉴定
? 自动读取结果后：
－计算机通过鉴定软件的分析得到鉴定结果。
? 人工读取结果后：
－转换成数字编码，然后与鉴定编码索引比较得到鉴定结果。
结果报告单上每三个试验划为一组，每组中的试验如阳性分别值1，2，4(如阴性则为0)，然后将各组中3个试验得值相加。得到一组9位数的编码，前4位数是（1.0-1.B）的值，接着4位数是（0.0-0.B）的值，第9位数是补充试验：RIB，CEL（1.C,1.D）的值。将这组9位数编码输入计算机，通过鉴定软件得鉴定结果。
2661 2461 0 溶血葡萄球菌
质量控制
生产厂家已对不同保存时期的鉴定试条进行了系统的质控检查，对于希望进行质控的试验者建议使用以下菌株：
|
| URE | ADH | ODC | ESC | GLU | FRU | MNE | MAL | LAC | TRE | MAN | RAF | RIB | CEL | NIT | VP | bGAL | ArgA | PAL | PyrA | NOVO | SAC | NAG | TUR | ARA | bGUR |
| 1. | V | – | + | – | + | + | + | + | + | + | – | – | – | – | + | + | – | – | – | + | – | + | + | – | – | – |
| 2. | + | – | – | – | – | – | – | – | – | – | – | – | – | – | – | – | – | + | – | – | – | – | – | – | – | – |
| 3. | + | – | – | + | + | + | + | + | + | + | + | + | – | + | + | – | + | – | + | V | + | + | + | + | + | + |
| 4. | – | + | – | – | + | + | + | – | + | + | – | – | + | – | + | – | – | – | + | – | – | + | + | – | – | – |
1． 吕克杜纳西葡萄球菌 (Staphylococcus lugdunensis) ATCC 49576
2． 滕黄微球菌(Micrococcus luteus) ATCC 7468
3． 鸡葡萄球菌（Staphylococcus gallinarum） ATCC 700401
4． 猪葡萄球菌（Staphylococcus hyicus） ATCC 1
ATCC : American Type Culture Collection, 10801 University Boulevard, Manassas, VA 20110-2209, USA.
废弃物的处理
所有使用过的安瓿、鉴定试条、Tip头都要经过高压灭菌、焚烧或经消毒剂浸泡处理后再丢弃。
范围
ID 32 STAPH系统仅限于鉴定包括在数据库中的菌属（见使用说明后的菌名表），不能用于鉴定其它的微生物或排除它们的存在。
建议
使用ID 32 STAPH鉴定试条时为得到准确结果应注意以下几点：
? 根据使用手册使用推荐的培养基(P培养基或血平板)；
? 调整菌悬液浊度在0.5麦氏单位(如果用ATB Express仪或微型API仪读取结果，须用浊度计检测)；
? 用ATB电子加样器或接种器准确分加55ml于每孔中(尤其在自动读取结果时)；
? 注意培养时间(24小时)和读取结果时间(滴加试剂后5-1 0分钟，除VP试验外)；
选用合格的指示剂，注意有效日期和保存条件。安瓿打开后超过一个月不要再使用。
生化反应表
| 孔号 | 简 称 | 中 文 / 反应底物 | 结 果 | |
| 阴 性 | 阳 性 | |||
| 1.0 | URE | 脲酶 | 黄／浅橙黄 | 粉红／紫 |
| 1.1 1.2 | ADH ODC | 精氨酸双水解酶 鸟氨酸脱羧酶 | 黄 | 红／橙 |
| 1.3 | ESC | 七叶灵(Hydrolysis) | 无色／浅灰色 | 啡／黑 |
| 1.4 | GLU | 葡萄糖 |
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| 1.5 | FRU | 果糖 |
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| 1.6 | MNE | 甘露糖 |
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| 1.7 | MAL | 麦芽糖 |
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| 1.8 | LAC | 乳糖(Fermentation) | 红 | 黄 |
| 1.9 | TRE | 海藻糖 | 红／橙 | 黄／橙 |
| 1.A | MAN | 甘露醇 |
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| 1.B | RAF | 棉子糖 |
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| 1.C | RIB | D-核糖 |
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| 1.D | CEL | 纤维二糖 |
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| 1.E 1.F |
| Empty cupules |
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| NIT 1 + NIT 2 / 5 分钟 < 10 分钟 | |
| 0.0 | NIT | 硝酸盐还原(Reduction) | 无色 | 粉红/紫 |
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| VP A + VP B / 10分钟< 12分钟 | |
| 0.1 | VP | 丙酮酸盐 | 无色 | 粉红/红 |
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| FB / 5分钟< 10分钟(?GAL à PyrA) | |
|
|
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| 无色 |
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| 0.3 | ArgA | L-精氨酸芳酰胺酶 | 无色 | 橙 |
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|
|
| 无色 |
|
| 0.5 | PyrA | 吡咯酮烷芳酰胺酶 | 无色 | 橙 |
| 0.6 | NOVO | 新生霉素 | 红 红/橙 | 黄 黄/橙 |
| 0.7 | SAC | 蔗糖(Fermentation) | ||
| 0.8 | NAG | N—乙酰 葡萄糖甙酶(Fermentation) | ||
| 0.9 | TUR | 图拉糖 | ||
| 0.A | ARA | L-阿拉伯糖(Fermentation) | ||
| 0.B | bGUR | b-D-葡萄糖醛酸盐 | 无色 | 黄 |
| 0.C |
| Empty cupules |
|
|
| 0.D |
|
|
| |
| 0.E |
|
|
| |
| 0.F |
|
|
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