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【转贴】嗜水气单胞菌的生物危害评估报告  

2010-11-03 23:00:00|  分类: 生物安全 |  标签: |举报 |字号 订阅

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一、细菌的传播与致病

        嗜水气单胞菌在自然界中广泛分布,它是水中常居菌,可以从生水、氯化水和污染水中分离到,每年的5月至11月,该菌在水中的含量最高。它有致病性菌株和非致病性菌株之分,致病性菌株可感染鱼类、两栖类、爬行类、鸟类和哺乳类等动物。人亦可因致病性嗜水气单胞菌感染而发生肠道内和肠道外的感染。肠道内的感染主要表现为腹泻及食物中毒,占夏季腹泻的第二或第三位。腹泻的程度从较温和的腹泻(分泌性腹泻)至严重的细菌性痢疾样腹泻(脓血便)均有,少数情况下还可引起霍乱样腹泻。好发人群为5岁以下的幼儿。此外临床上还可表现为急性出血性败血症,慢性感染表现为皮肤溃疡等。

二、细菌的生物学特性

        嗜水气单胞菌属于气单胞菌属,是革兰氏阴性直杆菌,大小0.3~1.0um×1.0~3.5um,有动力。生长温度范围较宽,营养要求不高,普通培养基即可。但不能在TCBS上生长。

三、细菌的实验室检查及其它检查

1.标本的采集 根据不同的疾病分别采集粪便或肛试、血液、脓汁、脑脊液和血液等。待检样本可包括病料、水样及送检菌株,病料既可是无菌采取的易感动物的肾、肝、脾等未污染病料,也可是粪便或病变皮肤等污染病料,如样本为菌株,应先接种于普通肉汤28℃培养24h,再划线接种于普通琼脂平板,使之形成单个菌落,以供鉴定用;

2.染色镜检  呈革兰氏阴性短杆菌;

3.分离培养 嗜水气单胞菌在普通琼脂平板上,28℃培养24h后的菌落为光滑、微凸、圆整、无色或淡黄色,有特殊芳香气味;

4.氧化酶试验 嗜水气单胞菌应为阳性;吲哚试验 嗜水气单胞菌应为阳性;

5.AHM鉴别培养  挑取普通琼脂平板上氧化酶试验阳性的单个菌落少许。穿刺接种于AHM鉴别培养基上37℃培养24h。嗜水气单胞菌的表现为:顶部仍为紫色,底部为淡黄色;细菌沿穿刺线呈刷状生长,即运动力阳性;部分菌株顶部呈黑色。

6.糖发酵试验 嗜水气单胞菌可发酵葡萄糖、蔗糖、阿拉伯糖、七叶苷及水杨苷等5种糖。

7.嗜水气单胞菌致病性鉴别:

(1)脱脂奶平板试验:取AHM鉴别培养基表面菌落少许,接种划线于1%脱脂奶蔗糖胰蛋白胨平板28℃培养24h。若菌落周围出现清晰、透明的溶蛋白圈,判为阳性。

(2)斑点酶联免疫试验:取AHM鉴别培养基表面菌落少许,接种蔗糖胰蛋白胨肉汤 28℃摇床(30r/min)培养48h,10000r/min离心10min,取上清。用微量加样器取5μL点样于硝酸纤微素膜光面 37℃烘干,置20%脱脂奶中, 37℃封闭1h。用含吐温-20的磷酸盐缓冲液洗5次,每次2min;置1:50兔抗嗜水气单胞菌蛋白酶抗血清中,37℃作用1h,用含吐温-20的磷酸盐缓冲液洗5次,每次2min;置1:10酶标羊抗兔抗血清中,37℃作用1h。用含吐温-20的磷酸盐缓冲液洗5次,每次2min;加3,3-二氨基联苯胺-过氧化氢中显色。待斑点明显后,用去离子水终止显色。设无菌肉汤作阴性对照。以出现明显棕色斑点者判为阳性。

总结以上实验结果,符合以下特性者应判为致病性嗜水气单胞菌:

1)在普通琼脂平板上,  28℃培养24h后的菌落为光滑、微凸、圆整、无色或淡黄色,有特殊芳香气味;

2) 在AHM鉴别培养基上,顶部仍为紫色,底部为淡黄色;细菌沿穿刺线呈刷状生长,即运动力阳性;部分菌株顶部呈黑色;

3)氧化酶试验阳性,革兰氏染色为阴性短杆菌;

4)吲哚试验阳性,发酵葡萄糖、蔗糖、阿拉伯糖、七叶苷及水杨苷等5种糖类;

5)脱脂奶平板试验阳性或斑点酶联免疫试验阳性。

四、细菌的生物安全防护

        根据《病原微生物生物实验室生物安全管理条例》中的有关规定,人间传播的微生物名录(待颁布)嗜水气单胞菌属于三类,BSL-2。在实验室操作上对于有高风险的人员,如免疫缺陷者,要严格限制进入。对于针头和锐器要有警示,要用专门存放锐器的容器盛装。

        在个人防护上,要求穿隔离衣,出实验室时应将隔离衣脱下;在可能接触病原时要戴一次性使用的手套,但不要戴手套接触清洁表面(如电话等),脱去手套后要洗手;在BSC外面进行操作时,要进行面部保护,如套口罩、眼罩、面罩等。要有泡手消毒缸和洗眼台,还要有高压消毒器。


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