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【转帖】菌群失调的解释  

2006-12-07 20:33:51|  分类: 网络资源 |  标签: |举报 |字号 订阅

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    以便培养结果判定是否为菌群失调是不科学的,因为粪便中大约有500种左右的细菌,绝大多数为专性厌氧菌,包括双歧杆菌、乳杆菌、优杆菌、拟杆菌、消化链球菌等,也有少量的兼性厌氧菌、专性需氧菌和微需氧菌,如肠杆菌属细菌、肠球菌、葡萄球菌、酵母样菌等.这些细菌绝大多数是无法用常规的便培养方法(麦康凯和SS)培养出来的.要培养这些细菌需要十几种甚至几十种培养基,且鉴定过程复杂,耗时长(约2年左右).
    目前多数以涂片,革兰染色后,通过显微镜观察细菌形态的方法估计菌群的状况.张秀荣主编. 人民军医出版社出版的《肠道菌群粪便涂片检查图谱》会有很大的帮助.


    下面这段文字是对这一方法的简单介绍.

胃肠微生态学检测方法及临床意义

    胃肠微生态系是人体微生态学的重要组成部分,了解其不同部位的微生态学状况,应采取不同部位的标本进行检验,可采用插管法和剖腹手术时采取标本,但由于采样方法繁琐,患者依从性差,一般不予采用。以粪便菌群作为评估胃肠道生态状况的指标,由于其标本易得,已成为目前普遍采用的方法。

    事实上,粪便微生物群落的变化,是由微生物本身、宿主及宿主外环境等多种因素综合作用形成的,它并不是大肠以上各生态系的简单汇总,却又与各生态系菌群的变化有着千丝万缕的联系。粪便的微生物群落,在定性和定量上都是恒定的,不同年龄、不同饮食和不同种族均不会使其发生质的变化。只有当宿主处于病理状态时,尤其是发生胃肠道疾病时,才会使粪便菌群出现异常。

    粪便干重的1/3~2/5由细菌组成,其数量巨大,种类繁多,大约有500种左右的细菌「1」。在常见的十几种细菌中,绝大多数为专性厌氧菌,包括双歧杆菌、乳杆菌、优杆菌、拟杆菌、消化链球菌等,也有少量的兼性厌氧菌、专性需氧菌和微需氧菌,如肠杆菌属细菌、肠球菌、葡萄球菌、酵母样菌等。

    目前分析检测粪便中细菌数量和种类(也称为肠道菌群分析)的方法很多,总体可归纳为以下3大类。

1 培养法

    此法将新鲜粪便直接接种于多种不同的培养基上,对生长出来的菌落进行鉴定(一般鉴定到种)。通过控制接种粪便重量的方法可以对肠道菌群进行定量培养。将每种细菌的数量与参考值进行比较,或计算B/E(双歧杆菌/肠杆菌)值,即可评估肠道菌群的状况。B/E值〉1表示肠道菌群组成正常,〈1表示肠道菌群失调,值越低失调越严重「2」

    由于粪便中的细菌种类繁多,即使仅培养有意义的细菌,也需要十几种甚至几十种培养基,且鉴定过程复杂,耗时长。因此,此种方法常用于肠道菌群方面的科学研究,而不适于临床常规检验「3、4」

2 分子生物学方法

    即使使用了最先进的培养方法,我们用光学显微镜直接观察到的细菌中,也有40%80%是不能培养出来的,那么只能用分子生物学的方法证实其存在。

    目前,在肠道菌群的研究领域,用于研究的新技术,如:16SrRNA基因的聚合酶链反应、变性梯度凝胶电泳、脉冲场凝胶电泳、荧光原位杂交技术等5、6」

作者单位:中国医科大学附属第二医院检验科(110004) E-mail:jykjxz@cmu2h.com

3 镜检法

   镜检法是目前广泛采用的进行肠道菌群分析的方法,由于所需设备简单,操作简便,耗时短,很适宜临床应用。该方法是通过油镜观察革兰染色粪便涂片的菌群像,估计细菌总数、球菌与杆菌比例,革兰阳性菌与革兰阴性菌的比例,结合各种细菌的形态特点、有无特殊形态细菌增多等结果来综合判断菌群状况。

3.1粪便涂片的制作  

       取一洁净载玻片,在新鲜粪便上多处沾取标本,以30°~40°的角度,匀速推片于洁净的载玻片上,使其厚度与血膜相似。推片用后立即用清水冲洗,并置于消毒剂中消毒后,才可继续使用。

    取标本时应注意粪便的颜色、性状,是否有膜状物,遇黏液便、胨样便或水样便,可用便签直接涂片或滴注涂片,涂片可稍厚。

3.2染色方法

      革兰染色法,阳性菌染成紫色,阴性菌染成红色,合格涂片中阳性菌和阴性菌要对比鲜明。

3.3显微镜检查方法  

3.3.1观察细菌总数  

      观察菌群涂片时首先要计数细菌总数,这是肠道菌群是否处于平衡状态的一个重要指标。没有必要对细菌数进行准确计数,初学者可以先计数部分(如1/8视野)油镜视野中细菌的数量,再对整个视野进行估计,观察几个视野后取平均值。一般来说,每视野细菌数在501~5000个为正常,101~500个为轻微减少,11~100个为明显减少,10个以下为显著减少,也有高于5000的情况,但较少见,临床意义不大。细菌总数减少则与肠道菌群失调存在密切关系,应引起重视,并结合细菌类别构成等指标进行综合评估。

3.3.2细菌类别构成  

      仅仅计数细菌总数并不能完全反映肠道菌群的状态,细菌种类及数量与粪便性状和胃肠道功能有着密切的联系,而且正常粪便中常见细菌的构成是基本恒定的,不受稀释和浓缩的影响。因此粪便中细菌类别构成是更有意义的指标。

    由于通过涂片镜检的方法无法精确区分细菌种类,一般就细菌形态和染色性将细菌分为4大类,即革兰阳性杆菌、革兰阴性杆菌、革兰阳性球菌、革兰阴性球菌,通过计算4者的比例来评估肠道菌群的特征。

    具体计数方法为:计数1000个细菌中各类细菌的百分率。可先计数部分视野中(如1/8视野)各类细菌数,然后估计全视野中的各类细菌数。

    由于正常粪便中数量最多的细菌如双歧杆菌、乳杆菌、优杆菌、拟杆菌等均为革兰阳性杆菌,因此,革兰阳性杆菌在正常粪便中所占的比例最大,其次为革兰阴性杆菌。各类细菌随年龄改变会有一些变化,尤其是婴幼儿期,革兰阳性杆菌所占比例在出生后会逐渐增多,至半岁时达最高,以后逐渐下降。成人时期,革兰阳性杆菌与革兰阴性杆菌的比例约为3:1左右。革兰阳性球菌和革兰阴性球菌的量较少,只占总数的5%~20%40 岁以后,阳性杆菌逐渐减少,阴性杆菌逐渐增多。60岁以后,两类细菌的数量趋向于接近,阳性杆菌只略多约5%~10%,此时阳性球菌和阴性球菌只占5%~15%的比例。详细的各年龄细菌比例参考值见表1「7」

3.3.3特殊形态细菌  

      有时会在粪便菌群涂片中,看到一种非正常细菌明显增多,甚至占绝对优势,如酵母菌、葡萄球菌和艰难梭菌,这些菌是严重的假膜性肠炎和真菌性肠炎的病原菌,应引起高度重视。

3.4 结果报告方式及临床意义  

      肠道菌群的报告方式有2种,即比例法和分度报告法

3.4.1比例法  

       以球菌与杆菌比例的方式报告,简称球杆比,参考值为1:3(成人)。也可直接报告“革兰阳性杆菌:革兰阴性杆菌:革兰阳性球菌:革兰阴性球菌”的比例(直接比例法),如603451,参考范围见表1

    如结果在参考范围内,则表明菌群正常,如果球杆比>1/3,表明菌群失调,比值越大,失调越严重,可出现比例倒置。菌群失调时,直接比例法的后2个或3个比值会升高,第1个比值下降,这种变化越严重,表明菌群失调越严重。

3.4.2 分度报告法  

      根据涂片中细菌的总数,菌群中细菌的构成比例,有无特殊形态细菌增多等情况,结合患者的年龄、粪便性状、使用抗生素状况等综合分析,将失调程度分为3度,具体参考标准见表2

2  菌群失调分度报告的依据(参考标准)


涂片结果

粪便外观

临床意义

Ⅰ度菌群失调症

细菌总数在正常范围,正常低值,或略有减少。革兰阳性杆菌在正常低值,革兰阴性杆菌多有增加,革兰阳性球菌在正常高值或略增多,类酵母样菌,梭菌未见或极少量。总之,仅是数量和比例轻度改变。

可以是正常成形软便,或不成形软便或稀便。

为潜伏型,较轻的菌群失调,临床症状不明显,可逆,即只要去除病因,不经治疗也能恢复。

Ⅱ度菌群失调症

细菌总数明显减少或无明显改变,偶见部分病例细菌显著减少。革兰阳性杆菌明显减少;革兰阴性细菌明显增多,有时达90%以上,有的病例革兰阳性球菌增多(常见有葡萄球菌、链球菌),杆菌和球菌比例倒置(正常值约为7525左右),类酵母菌或梭菌明显增多。总之,粪便菌群已有明显改变。

多为程度不等的稀便,也可为黏液便,水样便,脓血样便或柏油样便。

为局限型,中度的菌群失调,不可逆,不经治疗难以自然恢复。临床有慢性病的表现,如慢性肠炎,慢性痢疾,溃疡性结肠炎,肾盂肾炎等。Ⅱ度菌群失调需要积极治疗,协助患者恢复菌群平衡状态。

Ⅲ度菌群失调症

细菌总数呈明显减少。粪便中原来的菌群大部分成员被抑制,只有一种细菌或真菌占绝对优势,最常见有葡萄球菌、白色念珠菌、致病性大肠杆菌、艰难梭菌,铜绿假单胞菌和肺炎克雷伯菌等。总之,原菌群中的某一种少数菌成为菌群的绝对优势菌是Ⅲ度菌群失调症的主要特点,应同时做粪便细菌的分离和鉴定。

多为程度不等的稀便,也可为黏液便,常呈黄绿色或黑色,有时可见膜状物。

为弥漫型,严重的菌群失调,又称二重感染。主要表现急性腹泻与肠功能紊乱。由葡萄球菌和艰难梭菌引起的假膜性肠炎,真菌性肠炎可伴有电解质失衡、低蛋白血症,病情重或凶险。Ⅲ度菌群失调的病人必须及时积极治疗,挽救病人生命。

 

 
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