菌株 |
目的 |
抗真菌药物 |
MIC |
MIC范围几率% |
近平滑 |
质控菌株 |
两性霉素B |
0.5~4.00 |
99.1 |
念株菌 |
|
氟康唑 |
1.0~4.00 |
99.1 |
ATCC22019 |
|
伊曲康唑 酮康唑 Posacinzole Ravuconazole Voriconazole 5-FC |
0.12~0.50 0.06~0.50 0.06~0.25 0.03~0.25 0.03~0.25 0.12~0.50 |
99.0 99.0 |
克柔念株菌 |
质控菌株 |
两性霉素B |
1.0~4.0 |
99.5 |
ATCC6258 |
|
氟康唑 伊曲康唑 酮康唑 Posacinzole Ravuconazole Voriconazole 5-FC |
16~128.0 0.25~1.0 0.25~1.0 0.12~1.0 0.25~1.0 0.12~1.0 8.0~32.0 |
99.1 94.0 100.0 |
黄曲霉菌 |
参考菌株 |
两性毒素B |
0.5~4.0 |
100.0 |
ATCC204304 |
|
伊曲康唑 Posacinzole Ravuconazole Voriconazole |
0.2~0.5 0.06~0.5 0.5~4.0 0.5~4.0 |
100.0 100.0 100.0 100.0 |
烟曲霉菌 |
参考菌株 |
两性霉素B |
0.5~2.0 |
100.0 |
ATCC204305 |
|
伊曲康唑 |
0.12~1.0 |
100.0 |
伊曲康唑:对于伊曲康唑以及新的三唑类药物,MIC值判定为100%抑制生长,即读数为0时的最低药物浓度;这类药物对于曲霉菌属以及其它条件致病性丝状真菌出现拖尾时,可能反映在临床上为相对耐药.
5.大量液体培养基稀释法:用大量稀释法测试时,用RPMI-1640液基将100倍药物终浓度的储存液稀释10倍.达到终浓度的10倍,储存液的制备与上述方法相似,孢子或孢囊孢子悬液用振荡混匀15s,用培基进行1:100稀释,达到测试浓度(0.4~5×104CUF/ml).将0.1ml的10×终浓度的药液加入12mm×75mm的无菌管中,-70℃冻存,6个月以上而不出现药物降解;每管在测试当天接种0.9ml真菌稀释悬液;生长对照为0.1ml不含药物的药物稀释液加0.9ml的接种悬液.
上述试管在35℃静置孵育;MIC值的判读与微量液体培养基稀释法程序相同.
6.改良方法:用终点色法可以增强不同实验室之间伊曲康唑MIC值判定的一致性,加入2倍浓度的比色指示剂(改良刃天青)至2×浓度的标准RPMI-1640液体培养基,然后按上述程序操作,对于比色法,需观察加样孔的颜色,蓝色表示无菌生长,紫色表示部分生长;红色表示生长.唑类药物MIC值即颜色由蓝色到紫色轻,微改变时的最低药物浓度;而对于两性霉素B,MIC即为无颜色改变的(均呈蓝色)或第一孔保持蓝色时MIC.
7.实验室质量控制:每次试验均须进行质控菌株的检测,其目的在于监测药敏试验的准确度、精密度、所用试剂、测试条件以及仪器的情况,保证试验者的操作以及结果的准确客观.
包括培养基及试验用器皿的质控;每次试验、每批培养基、试验用试剂器皿均需用质控菌株或参考菌株进行测定,其MIC值应在规定范围内(表1)
四、评价
与M38-P方案相比,M38-A方案在如下几方面进行了调整:首先,受拭的抗真菌药物中增加了新型三唑类药物posaconzole、Ravuconazole 、Voriconazole,与这些药物在系统性丝状真菌感染中越来越多的应用密切相关;其次,在终点判读时,将伊曲康唑的MIC值定交为100%生长抑制,即读数为0时的最低药物浓度,其原因是伊曲康唑和其它新型的三唑类药物,与氟康唑和酮类唑不同,判读终点时不存在拖尾;第三、质控菌株在原有近平滑念株菌ATCC22019和克柔念株菌ATCC6285的基础上,增加了参考菌株黄由霉菌ATCC204304和烟曲霉菌ATCC204305;质控药物也有相应的增加.
M38-A方案是一个测定丝状真菌对不同抗真菌药物敏感性的标准化程序,制定该方案的目的是希望经过相同的标准化程序,使不同实验室获得的体外抗真菌药物敏感性试验结果,与体内疗效之间具有良好的一致性,尽管M38-A中的受试真菌只有曲霉属、镰刀菌、根霉菌、波氏假阿利霉菌和申克孢子丝菌的菌丝相,仍然有不少学者应用此方案所描述的试验程序,从接种量、孵育温度、孵育时间以及终点判定等方面,探计了常见皮肤癣菌[1-3]如红色毛癣菌和暗色真菌[4,5]的抗真菌药敏试验;同时也应用该程序评价了特比萘芬[6]和其它一些新型药物[3]的抗真菌活性,结果理想,拓宽了该方案的应用范围,有望建立有关红色毛癣菌和暗色真菌的抗真菌药敏试验标准化方案,更好地为临床治疗提供依据并为新药评价提供可靠的手段.
摘自:《中华检验医学杂志》2005年1月第28卷第1期
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