注册 登录  
 加关注
   显示下一条  |  关闭
温馨提示!由于新浪微博认证机制调整,您的新浪微博帐号绑定已过期,请重新绑定!立即重新绑定新浪微博》  |  关闭

hampc168

microorganism

 
 
 

日志

 
 

【转贴】API NH 奈瑟氏菌及嗜血杆菌鉴定系统  

2010-09-12 21:05:59|  分类: API鉴定系列 |  标签: |举报 |字号 订阅

  下载LOFTER 我的照片书  |

Actinobacillus actinomycetemcomitans

伴放线放线杆菌

Haemophilus influenzaeⅥ

流感嗜血杆菌Ⅵ

 

奈瑟球菌属:

Haemophilus influenzaeⅦ

流感嗜血杆菌Ⅶ

Neisseria gonorrhoeae

淋病奈瑟球菌

Haemophilus influenzaeⅧ

流感嗜血杆菌Ⅷ

Neisseria meningitidis

脑膜炎奈瑟球菌

Haemophilus parainfluenzae

副流感嗜血杆菌

Neisseria lactamica

乳糖奈瑟球菌

Haemophilus parainfluenzaeⅠ

副流感嗜血杆菌Ⅰ

Neisseria polysaccharea

多糖奈瑟球菌

Haemophilus parainfluenzaeⅡ

副流感嗜血杆菌Ⅱ

Neisseria cinerea

灰色奈瑟球菌

Haemophilus parainfluenzaeⅢ

副流感嗜血杆菌Ⅲ

Neisseria sicca

干燥奈瑟球菌

Haemophilus parainfluenzaeⅣ

副流感嗜血杆菌Ⅳ

Neisseria mucosa

粘液奈瑟球菌

Haemophilus parainfluenzaeⅤ

副流感嗜血杆菌Ⅴ

Neisseria spp

奈瑟菌属某些种

Haemophilus parainfluenzaeⅥ

副流感嗜血杆菌Ⅵ

Neisseria subflava

微黄奈瑟球菌

Haemophilus parainfluenzaeⅦ

副流感嗜血杆菌Ⅶ

 

嗜血杆菌属:

Haemophilus parainfluenzaeⅧ

副流感嗜血杆菌Ⅷ

Haemophilus influenzae

流感嗜血杆菌

Haemophilus aphrophilus

嗜沫嗜血杆菌

Haemophilus influenzaeⅠ

流感嗜血杆菌Ⅰ

Haemophilus paraphrophilus

副嗜沫嗜血杆菌

Haemophilus influenzaeⅡ

流感嗜血杆菌Ⅱ

Haemophilus somnus

睡眠嗜血杆菌

Haemophilus influenzaeⅢ

流感嗜血杆菌Ⅲ

 

布兰汉球菌属:

Haemophilus influenzaeⅣ

流感嗜血杆菌Ⅳ

Branhamella catarrhalis

粘膜炎布兰汉球菌

Haemophilus influenzaeⅤ

流感嗜血杆菌Ⅴ

   

 

API NH 是奈瑟氏球菌属、嗜血菌属和卡他布兰汉氏菌的鉴定系统,它应用标准型和微型化的测定和相应的数据库。该系统能鉴定说明书末鉴定表中所包括的种。API NH 也能鉴定流感嗜血菌(Haemophilus influenzae)和副流感嗜血菌(Haemophilus parainfluenzae)的生物型和青霉素酶的检测。


原理

  API NH 试验条是由10个含干粉的底物所组成。这些底物可进行12个鉴定试验(酶反应和糖发酵)和检测青霉素酶(特别是在流感嗜血菌、副流感嗜血菌、卡他布兰汉氏菌和淋病奈瑟氏菌)。

  培养后的反应结果可从自然变色或加入试剂后呈现而得。

  培养2小时后,反应结果用肉眼观察,鉴定结果可用与鉴定表对比或相应的鉴定软件。

试剂

  一套包括(10次测定):

  -10个 APINH 试验条

  -10个安瓿0.85% NaCl培养基(3ml)

  - 1个安瓿JAMES 试剂

  - 1个安瓿ZYM B试剂

  -10个棉签*

  -10个培养盒;

  -10份结果报告单;

  - 1份说明书。

  * 这些棉签严格使用于收集培养基上的菌落,而不用于从患者直接收集样品。

附加产品(不包括在一套中)

  - McFarland 标准(ref. 70 900) .4的范围

  - 矿物油(石腊油) (ref. 70 100)

  - 吸管或PSI管 (ref. 70 250)

  - 安瓿架(ref. 70 200)

  - 鉴定软件


试验室必备设备

  - 35-370C培养箱

  - 冰箱

  - 本生煤气灯

  - 记号笔


培养基和试剂的成份

NaCl 0.85% 培养基 2ml

NaCl             8.5g

无离子水          1000ml


JAMES 试剂 5ml

J 2183化合物( 保密 )    0.5g

HCl1N           100 ml

S24/25 : 避免与皮肤和眼睛接触

如与眼睛接触,要用水冲洗至少10分钟。

如与皮肤接触,要用肥皂水充分冲洗。


ZYM B 试剂  8ml

坚牢兰 BB          0.35g

2- 甲氧基乙醇        100 ml

        有毒

R60:可能引起不孕

R61:对未出生孩子造成伤害

R10:易燃

R20/21/22:吸入、与皮肤接触和吞下都会有伤害

S53:避免暴露(避免与皮肤和眼睛接触,避免吸入

S45:如有不舒服感,立即医疗处置


试验条和培养基的贮存
  试验条与培养基在有效期(有效期标在包装上)内,应贮于2一8℃。

试剂的贮存

  试剂在有效期内应贮于黑暗的2-8℃中

  试剂在安瓿瓶打开后,或将试剂转到滴瓶中(打开日期必需标在瓶上),只有一个月的有效期(以第一次打开时间为准)。

  ZYM B和JAMES试剂对光敏感:瓶应包在铝箔中,只有用时才从冰箱中取出,同时应避免长时间放在室温中。

  ZYM B试剂对水和空气十分敏感:用干吸管移至滴瓶,并保持瓶的绝对密封。FB试剂一旦变深琥铂色表示变质,则不能使用。


试剂的使用

  在使用前,试剂需达室温(20-30℃)

  1ZYM试剂:

    。按“警告和注意事项”(带滴头安瓿)所图示万法,打开试剂安瓿。

    。加一滴试剂

    。用后,小心密闭瓶,并按“试剂贮存”所示贮存。

  2.JAMES试剂:

    。按“警告和注意事项”(无滴头安瓿)所图示方法,打开与JAMES试剂有关的溶剂安瓿。

    。用完全干的吸管吸取安瓿瓶中的内含物,并转该溶剂到滴瓶(含干的活性成分)。

    。按上滴头。

    。小心盖严。

    。震荡。

    。等待5-10分钟,直至活性成分完全溶解。

    。用新制试剂,小心盖严,并按“试剂贮存”所示贮存。

警告和注意事项

  。仅供体外诊断用

  。合格检验科人员应该使用无菌操作技术,并防范传染性物质带入。

  。不用口吸样本或试剂

  。不使用过期试剂。

  。使用前,将试剂从冰箱中取出,使其达室温(20-30℃)。

  。小心启开启安瓿瓶:

    一用手垂直握住安瓿瓶(白色瓶盖朝上)。

    一尽量将瓶盖压下

    一用大姆指顶住瓶盖上斜面部分。

    一向外加压,使瓶盖内瓶尖断裂

    * 无滴头的安瓿: 小心取开瓶盖

    * 有滴头的安瓿瓶, 垂直倒置安瓿,挤压瓶盖,将所有试剂倒入滴瓶

  。所有接过接种的试验条应视为带传染性,作适当处置。

  。所有患者标本和微生物培养物都是潜在的传染物,应按推荐的注意事项(NCCLSM29-A,Protection of Laboratory Workers from Instrument Biohazards and infectious Disease Transmitted by Blood,Body Fluids ,and Tissue;Approved Guideline-Decomber 1997) 作处理。

  。完成测试、读和判断结果后,所有的标本和接种过的试验条在丢弃之前,都需经高压天菌、烧烬或浸泡杀菌剂中。

  。试验结果的判断应由合格的微生物家所作,同时应将病史、标本来源、菌落和显微形态考虑在内,如有可能,再作一些补充试验,尤其是抗生素敏感谱。


使用说明

  标本和细菌培养物应视为传染物,应由训练有素的合格检验师才能作适当的处置。

  无菌技术和对该研究菌群的操作,都应根据以下进行:“NCCLSM29-A , Protection of Laboratory Workers from Instrument Biohazards and Infectious Disease Transmitted by Blood, Body Fluids, and Tissue ; Approved Guideline-December 1997”。.

  附加操作注意点,参照微生物和生物医学试验室生物安全手册,HHS publication No. (CDC) 93-8395,3rd Edition (May,1993) 或本地规定。


菌落选择

  所选菌株必须属于以下菌属:

  一奈瑟氏菌属(革兰氏阴性球菌通常邻近成对排列)。

   卡他布兰汉氏菌亦呈相同的形态及生理特征。

  一嗜血菌属(革兰氏阴性多形态,有营养要求的小杆菌)。

   这些细菌营养要求高,常需培养在加有Poly Vite X的巧克力琼脂上,富CO2大气环境。

  一用于API NH中的菌悬液需调至4 McFarland 浊度,通常还需转代。在用API NH 试验条之前,以下培养基可用于挑取菌落:

  一 Poly Vite X 的巧克力琼脂或类似琼脂(T-M琼脂),加或不加抗生素。

  一血琼脂培养基(哥伦比亚、胰酶-大豆、纽约培养基)也可用,不过这些生化反应的强度略有不同(这一点在读结果时应考虑到)。

  一如果从其它培养基分离的菌落,应在上述的任一种培养基中传种一次。

   传种时,应在富CO2的大气中,35-37℃培养18-24小时(为了在用API NH 试验条时,得到细菌的最适酶活的结果)

  注:需要适当注意的细菌 (例如布鲁氏菌属 Brucella 、弗郎西丝氏菌属Francisella)不包括在 APINH数据库内。修改方法的应用必须确定是否有这些菌。


试验条的准备

  。准备培养基(盘和盖)

  。在盘的沿边写上菌株号(不要写在盖上,易错)

  。把试验条从其包装中取出。

  。把试验条放入培养盒。

  。弃去干燥剂。


接种物的准备

  。按“警告和注意事项”(无滴头安瓿)所示方法,打开0.85%NaCl培养基(2ml)。

  。用一无菌棉签,挑取少许分得很开的菌落,制成相当于4McFarland浊度的悬液,充分混匀。

  。悬液制备好无应立即使用。

试验条的接种

  。将菌液加于各杯内,避免产生气泡(将培养盒稍前倾,吸管和滴管的头靠住杯的边沿。

   - 前7孔(PEN到URE):只加满管的部分(50ul)。

   - 后3孔([LIP/ProA]、[PAL / CGT]、[βGAL /IND] )则完全充满(管及杯部分):约150ul,但不要加成凸液面。

  。前7孔(PEN到URE)覆盖石腊油(只覆盖划底线的试验,不包括[]):

  注意:加液程度很重要,管部分加液量过多或过少会导致假阳性或假阴性结果。

  。盖好培养盒。

  。放35-37℃,有氧环境下培养2小时。


读试验条

  经过2小时的培养后,根据使用手册中的读表判读各反应结果:

  。记录自然发生的反应:在结果单上记下“+”或”-“。

  警告:后三个管是双功能的,每一个管均为两项试验:

   - 8:[LIP](自然反应) / [ProA](加试剂后反应)

   - 9:[PAL](自然反应) / [GGT](加试剂后友应)

   - 10:[βGAL](自然反应) / [IND](加试剂后反应)

  [LIP]、[PAL]和[βGAL]的结果均应在加试剂之前记录下来。

  。于管8和9 [LIP/ProA] 和[PAL/GGT]中各加ZYM B一滴。

  。于管10[βGAL/IND]中加一滴JAMES试剂。

  。3分钟后读取结果,参考使用说明书的读表,并记录于结果单上。

   如果[LIP]反应阳性(兰色),则[ProA]反应判为阴性,决定加或不加ZYM B试剂。

   如果在经过2小时后,有几项反应(发酵、青霉素酶)可疑,则可将试条再培养2小时,再读一次结果(酶反应不能重读)。


结果介释

  。将反应结果编成数码形式:在结果单上,各试验被分成三个一组,每个试验标对应数为1、2或4的数值。将各组内阳性反应对应的数值相加,就得到一个4位的数字图谱。

  注:不要将第一个反应(青霉素酶)编码,第一组试验为GLU-FRV-MAL。

  。结果可以从鉴定软件或从使用手册的读表中寻找该数码。如果在几个种之间的鉴定概率不高的话,可根据列出的补充试验(表1和2)将其区分。这些试验的结果则是取自文献。

  。流感嗜血菌和副流感嗜血菌的生物分型是根据表1作出的。

  。青霉素试验:

  阳性反应(黄、黄绿、黄兰色)则表示有青霉素酶。该酶的存在,禁止青霉素类(青霉素G、氨基-、羧基及脲基青霉素)的使用。

  测定对其它β-内酰胺药物的敏感性。

  阴性反应 (兰色) 则表示无青霉素酶。


质量控制

  培养基、试验条和试剂在有效期内不同阶段需作系统的质量控制,,对自愿作质控者,推荐以下培养物:

  图谱得自:巧克力琼脂+PolyViteX培养基上培养的菌株,培养2或4小时后(见“读试验条”) ATCC: American Type Culture Collection, 12301 Parklawn Drive, Rockville,Maryland 20852,USA.



废物处理


  所有安瓿、吸管、试验条和培养盒使用后,在处理之前必需高压灭菌、焚烧或浸于杀菌剂。


局限性(应用范围)

  API NH 系统只能鉴定奈瑟氏菌属(Nesseria )、嗜血菌属(Haemophilus)和布兰汉氏属(Branhamella catarrhalis)中种的细菌(见说明书末的鉴定表)。不能鉴定范围之外的菌。


读表


测  定

反  应

  结     果

阴  性

阳  性

1) PEN

青霉素酶

兰色

(无青霉素酶)

黄色

黄-绿色

黄-兰色

(有青霉素酶)

2 )GLU

3) FRU

4)MAL


5)SAC

葡萄糖(产酸)

果糖(产酸)

麦芽糖(产酸)

蔗糖(产酸)

红色

红-橙色

黄色

橙色


6) ODC

鸟氨酸脱羧酶

黄绿色


灰绿色

兰色

7)URE

尿酶

黄色

粉红紫色

8a)LIP


脂酶

无色

浅粉色

兰色

(+沉淀)


9a)PAL

碱性磷酸酶

无色

浅黄色


黄色

10a)β-GAL

β-半乳糖苷酶

无色

黄色

8b)ProA

脯氨酸芳胺酶

如果LAP +,则


ProA 常常为一

ZYM B /3min

黄色

浅橙色

(如PAL+棕色)

橙色


9b)GGT

γ-谷氨酰转移酶

ZYM B /3min

黄色

浅橙色

(如PAL+黄橙色)

橙色

10b)IND


吲哚

JAMES / 3min


无色

粉色


  评论这张
 
阅读(718)| 评论(0)
推荐 转载

历史上的今天

评论

<#--最新日志,群博日志--> <#--推荐日志--> <#--引用记录--> <#--博主推荐--> <#--随机阅读--> <#--首页推荐--> <#--历史上的今天--> <#--被推荐日志--> <#--上一篇,下一篇--> <#-- 热度 --> <#-- 网易新闻广告 --> <#--右边模块结构--> <#--评论模块结构--> <#--引用模块结构--> <#--博主发起的投票-->
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

页脚

网易公司版权所有 ©1997-2017