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日志

 
 

【转贴】ID 32 C 酵母菌鉴定系统操作说明  

2010-09-12 20:58:26|  分类: API鉴定系列 |  标签: |举报 |字号 订阅

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ID 32 C是由标准化、微量化的生化试验与相应的数据库组成的适于酵母菌的鉴定系统。本系统鉴定的所有酵母菌列表于使用说明后的菌名表。鉴定试条可由ATB Express仪或微型API仪自动进行标准化的菌悬液的制备、接种、培养、读取结果、判定鉴定结果,也可人工进行。 

 
原理

  ID 32 C鉴定试条包括32个小孔,每一孔中含有一种脱水的碳水化合物底物。一种化学纯的无机半固体微量培养基与待测菌悬液一起被接种到小孔中,培养24 - 48小时后由ATB  Express仪或微型API仪测定结果,或人工读取结果,然后根据鉴定软件得到鉴定结果。

 

试剂

 

  一个ID 32 C试剂盒包括:

                -   25条ID 32 C鉴定试条;

                   -   25个培养用的盒子;

                  -   25个装有C培养基的安瓿;

                     -   50份结果报告;

                    -   1份使用说明。

 

另需以下产品(不包括在试剂盒内):

 

        -   悬浮液2ml(#70 700);

        -   吸液管或PSI吸液管(#70 250);

        -   ATB电子加样器(#99 040)或接种器(#15 740)和Tip头(#15 710);

        -   比浊仪:比浊计(#99 234)或ATB比浊仪或2麦氏单位的标准浊度管(#70 900);

        -   ATB Express仪或微型API仪和鉴定软件;

        -   RAT培养基(#41 794);

        -   安瓿管架(#70 200);

          -   密封罐或厌氧罐(如需要)。

 

需配备的实验室设备:

 

        -   30℃培养箱

        -   冰箱

        -   本生灯或酒精灯

        -   记号笔。

 

底物名称缩写及中英文对照

 

          0.0   SOR     山梨醇            1.0   GAL     半乳糖

          0.1   XYL     D-木糖             1.1   ACT     放线酮

          0.2   RIB       核糖                1.2   SAC     蔗糖

          0.3   GLY     甘油                 1.3   NAG    N-乙酰葡萄糖胺

          0.4   RHA     鼠李糖             1.4   LAT      DL-乳酸盐

          0.5   PLE      PaLatinosE     1.5   ARA    L-阿拉伯糖

          0.6   ERY     赤藓醇             1.6   CEL      纤维二糖

          0.7   MEL     蜜二糖             1.7   RAF     棉子糖

          0.8   GRT     葡萄糖醛酸     1.8   MAL     麦芽糖

          0.9   MLZ     松三糖             1.9   TRE      海藻糖

          0.A  GNT     葡萄糖酸盐      1.A  2KG     2-酮基葡萄糖酸盐

          0.B   LVT      乙酰丙酸盐     1.B   MDG    α-甲基-D-葡萄糖苷

          0.C   GLU     葡萄糖            1.C   MAN    甘露醇

          0.D   SBE     山梨糖         1.D   LAC     乳糖

          0.E   GLN     葡萄糖胺     1.E   INO      肌醇

          0.F   ESC     七叶灵         1.F   0          对照

  注:编号即为鉴定试条上所标数字

 

培养基的成份

 

悬浮液    2ml

蒸馏水

C培养基  7ml

(NH4)2SO4              5.0g

KH2PO4               0.31g

K2HPO4               0.45g

Na2HPO4             0.92g

NaCL                  0.1g

MgSO4                0.2g

CaCL2               0.05g

组氨酸              0.005g

色氨酸               0.02g

蛋氨酸              0.02 g

琼脂                   0.5g

维生素溶液             1ml

微量元素              10ml

蒸馏水        qsp  1000ml

PH:6.4-6.8

  注:尽管C培养基含有琼脂,但不需加热就能象液体培养基一样易于吸起。使用前最好置室温几个小时,勿振摇。

 

贮存

 

  ID 32 C鉴定条和C培养基应置2-8℃保存,包装袋上标有有效使用日期。

 

注意事项:

 

  ?   仅用于体外诊断

  ?   实验技术人员需进行无菌操作并且警惕病原菌的传染。

  ?   不要用嘴通过吸管吸取样本或试剂。

  ?   不要使用过期试剂。

  ?   置冰箱试剂使用之前应放至室温(20 ~30℃)。

  ?   按以下方法小心打开安瓿管:

-   用一手垂直握住安瓿管 (白色的塑料管向上)。

-   用力向下压住盖子。

-   用拇指压在瓶盖的斜面向外用力折断瓶盖里面的安瓿管上部。

-   对无滴嘴帽的安瓿管:小心移动盖子。

-   有滴嘴帽的安瓿管:将安瓿倒置,保持垂直位置,挤压瓶盖将所有试剂挤入滴管瓶中。

 

  ?   所有接种物均需认作具有传染性,应适当处理。

  ?   所有病人标本和微生物培养物均是潜在的传染体, 并根据1993年 NCCLS M29-T2:CDC《微生物学和生物医学实验室的生物安全手 册 》预防污染。

  ?   在完成实验,读取和判定结果后,所有的标本、溢出物和培养物品均须高压灭菌,经杀菌剂浸泡或烧毁。

  ?   结果的解释应由了解病人的病史、标本来源、菌落特征及显微镜形态学特征的微生物专家的进行,若有需要应结合抗生素敏感情况。

 

使用说明

 

  ?   标本和细菌培养物均应当作传染体,并由受过训练、有经验的技师做适当处理。

  ?   无菌操作和对细菌的防备措施均应按严格的操作程序进行;防备措施参考:(NCCLS M29-T2,第2版,试行指南:防止实验人员通过血液、体液、和组织感染传染性疾病的保护措施)

  ?   附加的预防措施,参考《微生物学和生物医学实验室的生物安全手册》 (CDC 93-8395,第3版,1993年5月)或各国的规程。


 

鉴定试条的准备:

 

      -从包装袋中取出鉴定试条;

   -去掉干燥剂;

   -盖上鉴定条的盖子;

   -在鉴定试条伸出的边沿处记录菌株信息。

 

接种液的准备:

 

        按“注意事项”指南打开一支装有2ml悬浮液的安瓿或用一支装有2ml无菌蒸馏水的试管。

       挑取1个或几个单个菌落制成菌悬液,浊度相当2个麦氏单位(用浊度仪检测或与麦氏标准浊度管对比调整)。

  注:如果自动读取鉴定试条的结果,必须用比浊仪调整菌悬液的浊度。

        打开一支装有C培养基的安瓿,取250?l(如用吸液管约5滴,用PSI吸液管10滴)菌悬液加入安瓿中。

 

接种

 

  自动接种:

         -   分别将鉴定试条、装有菌悬液和C培养基的安瓿和ATB Tip头装在ATB接种器的架子上;

        -   接种器自动混匀C培养基与菌悬液,分别在各孔中加入135?l。

  手工接种:

        -   混匀C培养基与菌悬液;

        -   用ATB电子加样器分别在鉴定试条的各孔中加入135?l;盖上鉴定试条的盖子,30℃培养24-48小时。

  注意:一些通气式培养箱会引起小孔中的培养基完全脱水,遇上这种情况,可将鉴定试条放在一个盛有少量水的密封罐中,从而形成潮湿环境而避免培养基干燥。

 

读取结果

 

  自动读取结果:

          -   由ATB Express仪或微型API仪自动检测各孔的生长情况,将数据输入计算机。

  人工读取:

         -   比较各孔与对照孔(0)的浊度,浊度比对照孔大的为阳性。

 

鉴定

 


  自动读取结果后:

         -   ATB Express仪或微型API仪自动将检测结果输入计算机,由鉴定软件分析判断得到鉴定结果。

  人工读取结果后:

         -   将结果转换成数字编码,根据编码检索表得到鉴定结果。

  报告单上每三个试验为一组,每组中的试验如阳性分别得值1、2、4(如阴性则为0),然后将各组中3个试验得值相加。得到一组10位数编码,前4位数是(1.0-1.B)的值,接着4位数是(0.0-0.B)的值,最后2位数是由以下补充试验组成:

  第9位数是MAN,LAC,INO(1.C,1.D,1.E)试验的值;

  第10位数是GLU,SBE,GLN(0.C,0.D,0.E)试验的值。

  将这一组10位数的编码输入计算机,通过鉴定软件的分析得到鉴定结果。

  只有七叶灵不计入编码,当计算机表明不易区分两种菌时可考虑这个试验结果。

 

7357 7676 77 土生隐球菌


  继续培养

  如果计算机结果出现以下情况,还须再培养24小时:

         -   鉴别力低;

        -   异常编码或可疑编码;

       -   或得到以下提示:鉴定不可靠,须培养48小时。

废弃物的处理

 

  所有使用后的安瓿管、盒子、吸管、Tip头和鉴定试条都必须高压灭菌、焚烧或经消毒剂浸泡处理后再丢弃。

范围

  ID 32 C系统仅限于鉴定包括在数据库的酵母菌,而不能鉴定以外的微生物或排除它们的存在。

建议

  使用ID 32 C鉴定试条时为得到准确结果应注意以下几点:

         -   菌悬液浊度达到2麦氏单位(如用ATB Express仪或微型API仪时须用浊度计检测);

        -   用ATB电子加样器或接种器(如用ATB  Express仪或微型API仪判读结果时)在每孔中准确加入135?l接种液。

  


质量控制

 

  生产厂家已对不同保存时期的培养基、鉴定试条和试剂进行系统的质控检查,对希望进行质控检查的用户,推荐使用以下菌株:

 

  

  1. 光滑念珠菌         (Candida glabrata)              ATCC 64677       

  2. 季也蒙念珠菌     (Candida gilliermondii)         ATCC 6260 

  3. 土生隐球菌         (Cryptococcus humicolus) ATCC 64676

  4. 克柔氏念珠菌     (Candida krusei)                 ATCC 6258

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