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【基础】KOH拉丝试验  

2010-05-30 20:45:24|  分类: 细菌试验 |  标签: |举报 |字号 订阅

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氢氧化钾拉丝试验
(1)原理:革兰阴性细菌的细胞壁在稀碱溶液中易于破裂,释放出未断裂的DNA螺旋,使氢氧化钾菌悬液呈现粘性,可用接种环搅拌后拉出粘丝来,而革兰阳性细菌在稀碱溶液中没有上述变化。
(2)方法:取1滴40g/L氢氧化钾水溶液(应新鲜配制)于洁净玻片上,取新鲜菌落少许,与氢氧化钾水溶液搅拌混匀,并每隔几秒钟上提接种环,观察能否拉出粘丝。
(3)结果:用接种环拉出粘丝者为阳性,仍为混悬液者为阴性。

【基础】KOH拉丝试验 - hampc168 - hampc168

 
(4)应用:主要用于革兰阴性菌与易脱色的革兰阳性菌的鉴别。大多数革兰阴性菌于5~10s内出现阳性反应,有的则需30~45s,假单胞菌、无色杆菌、黄杆菌、产碱杆菌、莫拉菌等大多数在10s内呈阳性,不动杆菌、莫拉菌反应较慢,大多数菌株在60s内出现阳性,而革兰阳性菌在60s以后仍为阴性。

注意:

1.试验一般使用3-5%KOH%较好,常用4%比较方便(用V-P反应用40%KOH稀释10倍即可)。
2.4%KOH量不能太多,菌量不能太少,尤其不动杆菌,4%KOH要少一点,菌要多一点,否则易导致阴性。
3.要用新鲜培养物。

4.对于不动杆菌,因不容易拉起丝,不容易脱色,所以容易误认为阳性菌,操作时应讲究技巧:

用少量的5%KOH,取多量的细菌充分研磨,还需要将菌用环拖到KOH边缘处拉丝,即可出现丝状物(即阳性),切不可急躁。
5.几乎所有阳性菌对vancomycin敏感.所以可结合万古霉素敏感试验区分革兰阴性和阳性菌,前者耐药后者敏感(但有些阳性菌耐万古霉素,如:鹑鸡肠球菌、铅黄肠球菌、部分红斑丹毒丝菌、乳杆菌、星形奴卡氏菌、链霉菌)。因几乎所有阴性菌对colistin敏感,所以可以利用多粘菌素敏感试验区分阴阳性菌,但有些阳性菌可以出现敏感现象,这可以用于区分某些葡萄球菌:
金黄色葡萄球菌对多粘菌素B耐药,中间葡萄球菌对多粘菌素B敏感。

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