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【转贴】肠球菌分类与鉴定新进展  

2009-09-11 01:30:51|  分类: 交流 |  标签: |举报 |字号 订阅

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李金钟(新乐市医院,河北新乐050700)

关键词:肠球菌;分类;鉴定
肠球菌属(Enterococcus)细菌为兼性厌氧、触酶阴性、链状排列的革兰染色阳性球菌,其DNA的G+C含量为(37~
45)mo1%。多数菌种产生D抗原,有些菌种可产生Q抗原。为人和动物胃肠道正常菌群之一,可引起抵抗力低下宿主的多种机会感染,现已成为医院感染的重要致病菌。
1 分类
肠球菌最初被分类为肠内的革兰阳性球菌,之后归入链球菌属。1930年,随着Laneefield血清分型系统的建立,肠球菌被分类为D群链球菌,并可应用不同的生理生化特性区别于非肠球菌D群链球菌,如牛链球菌。由于该群菌l0℃ 、45℃ 、65 g/L NaCI中均生长,耐受6o℃30 min,并在40% 胆汁存在下水解七叶苷,因此Sherman建议使用“肠球菌属”这个名字来准确区分于链球菌。1984年,Sehlefer和Kilpper-Balz根据其DNA杂交资料,将肠球菌从链球菌属中分离出来,建立了肠球菌属,当时由2个菌种组成,即粪肠球菌、屎肠球菌。同年,Collins等又增加了鸟肠球菌、铅黄肠球菌、坚忍肠球菌、鹑鸡肠球菌(E gallinarum)和病臭肠球菌,除病臭肠球菌外,其他均分离于临床标本。之后,又报道了l2个菌种:殊异肠球菌(E.dispar)、小肠肠球菌(Ehirae)、黄色肠球菌(E. n cens)、蒙特肠球菌(E.mundtii)、棉子糖肠球菌(E ra~inosus)已分离于人体标本和其他标本;假鸟肠球菌(E.pesudoavium)、解糖肠球菌(E.saccharolyticus)分离于牛和其他动物;鸽肠球菌(E columbae)、盲肠肠球菌(E.cecorum)分别分离于鸽和鸡;硫磺肠球菌(E.sulfurous)分离于植物;孤立肠球菌(E seriolicida)分离于住院病人的耳渗出液和非野生或野生反刍动物,该菌被认为接近喜盐四联球菌( halophilus);黄尾杀手肠球菌(E solitarius)分离于黄尾鱼及亚临床乳腺炎的野牛分泌物,现认为更接近格乳球菌(L garv/eae)。这2个菌种不与AeeuProbe肠球菌探针反应,已建议不再包括在肠球菌属中。Teixeira等认为,黄色肠球菌是铅黄肠球菌的变种,作为独立的菌种命名未被公认。1998年以来,该菌属又增加了许多新成员,即驴肠球菌(E asird)? 、绒毛肠球菌(E.villorum) ]、血过氧化物肠球菌
(E haemoperoxidus)和摩拉维亚肠球菌(E moraviensis) ]、猪肠球菌(Eporcinus)和鼠肠球菌(E.ratti) ]、灰黄色肠球菌(E础 )和淡黄色肠球菌(E.pa//ens) ]、犬肠球菌(E ca.nis) 、Ephoeniculicola J、意大利肠球菌(E italicus)Is]、Ehermanniensis 、E saccharominimus LI?、和未正式命名的CDCPNS·E1、CDC PNS-E2、CDC PNS.E3 Ll“等l6个菌种。Graef等 。 对猪肠球菌的分类学地位和命名进行了研究,认为该菌与绒毛肠球菌为同义名。
最近,Ennahar等 通过16S rRNA序列分析认为,孤立肠球菌不是肠球菌属的成员,而与四联球菌有关,重新分类
为孤立四联球菌( solitarius)。肠球菌属经过上述分类变迁,到目前为止,至少由31个菌种组成。
2 鉴定
2.1 菌属的鉴定肠球菌属细菌呈链状排列,形态与染色很难与相关菌进行鉴别。该菌属细菌对万古霉素敏感或耐
药,吡咯烷酮芳胺酶(PYR)、亮氨酸氨基肽酶(LAP)阳性,无动力,大多数菌株l0℃ 、45℃ 、65 g/L NaCI中均生长。除乳球菌属与之相似外,与其他兼性厌氧、触酶阴性球菌很容易鉴别。在实际工作中,可以参照文献 进行各菌属之间的鉴别。
2.2 菌种的鉴定 初步鉴定为肠球菌后,可参照Carvalho等 ”提出的鉴定方案进行种间鉴别。该方案利用甘露醇、
山梨糖和精氨酸水解3个试验,将肠球菌分为5个菌群,从而缩小了鉴定范围。见表1。该菌属中仅有2个有动力的菌种,即鹑鸡肠球菌和铅黄肠球菌,它们可以根据色素产生来区别,铅黄肠球菌产生黄色色素,而鹑鸡肠球菌不产生色素。从临床标本中可以分离到的产生黄色色素的菌种有4个,即铅黄肠球菌、蒙特肠球菌、灰黄色肠球菌和淡黄色肠球菌。铅黄肠球菌有动力,可区别于另3个菌种。蒙特肠球菌水解精氨酸,不产酸于山梨糖可与灰黄色肠球菌和淡黄色肠球菌区别。而灰黄色肠球菌利用丙酮酸盐,不产酸于甲基·-D葡糖吡喃糖苷,淡黄色肠球菌恰与之相反。虽然黄色肠球菌曾被建议为有动力、产黄色素的一个菌种,但进一步的工作认为它为铅黄肠球菌的变种,作为独立的菌种未被公认。另一个产生黄色素的菌种是硫磺肠球菌,它为环境微生物,分离于植物,尚未见分离于临床标本的报道。
2.3 方法学 目前,临床微生物实验室对肠球菌的鉴定仍依靠表型特征的检测作为重要的鉴定方法。但由于许多肠
球菌种间的表型特征非常接近,因此要想明确鉴定需要花费数天的时间。自动化鉴定系统对一些少见的菌种往往鉴定失败。分子基因技术,如16S rRNA序列分析在阐明菌属间、菌种之间亲缘关系以及新菌种发现等方面发挥了巨大作用,利用种特异性基因探针 建立的PCR技术可快速准确地对23种肠球菌做出准确鉴定等,但由于这些方法操作烦琐、技术要求及成本较高,不适于临床实验室常规应用。振荡光谱分析技术(vibrational spectroscopic techniques) 15]综合了傅立叶变换红外线(Fouriei transform—infrared)和拉曼近红外线(neBl".IR Raman)光谱分析,根据细菌成份如DNA、RNA、蛋白质、细胞膜和细胞壁成分等所产生的许多不同振荡模式组成的指纹样频谱的原理进行肠球菌的鉴定。该方法由于需要很小量的细菌即可完成鉴定,明显缩短了培养时间;且操作简便,技术要求不高,成本较低,故认为是临床微生物实验室可选择的常规鉴定方法。

表1 肠球菌属细菌菌种间及与相关菌的鉴别特性

【转贴】肠球菌分类与鉴定新进展 - hampc168 - 茉莉花 

3 临床重要性
      肠球菌属细菌广泛存在于土壤、植物、乳制品等,为人、犬、禽、猪、马等动物胃肠道正常菌群之一。可引起尿道、血液、心内膜、腹腔、胆道等多部位感染。目前,肠球菌属由31个菌种组成。但许多菌种,特别是近年来命名的一些新菌种尚未从临床标本分离到。在临床肠球菌感染中,粪肠球菌仍占优势,约占80% ~90% ;其次是
屎肠球菌,约占5% ~15% ;其他如鹑鸡肠球菌、铅黄肠球菌、坚忍肠球菌、鸟肠球菌和棉子糖肠球菌仅占5% 以下。近年来,一些少见的菌种所致的感染时有报道,如盲肠肠球菌腹膜炎,鹑鸡肠球菌中枢神经系统感染,棉子糖肠球菌骨髓炎,鹑鸡肠球菌心内膜炎,小肠肠球菌心内膜炎和坚忍肠球菌心内膜炎等。在美国,肠球菌已经成为医院内尿路感染和创伤感染的第2位致病菌,菌血症的第3位致病菌。其原因是肠球菌对目前常用的一些抗生素天然耐药(如头孢类等),更重要的是,肠球菌对现在可利用的抗生素均具有获得耐药的能力,可以通过基因突变或通过质粒/转座子接受外来耐药基因而耐药。更为严重的是,肠球菌对氨基糖苷类(如庆大霉素)的高水平耐药,对糖苷类(如万古霉素)的耐药菌株在逐年增加,甚至出现了万古霉素依赖肠球菌(vancomycin-dependent enterococci)D6],给临床抗感染治疗带来了极大困难。我国上海、北京、广州等许多地区均有万古霉素耐药肠球菌Vancomycin.resistant enterococci,VRE)的报道,张正等 对2年间分离于院内感染标本的553株肠球菌进行了耐药分析,91.9% 的为粪肠球菌,对万古霉素、替考拉宁的耐药率分别为2.95% 、0.83% ,其中VanA6株、VanB9株、VanC3株有VRE的出现,使该菌在病人与病人之间传播的控制工作步入困境,由该菌引起的医院暴发性感染事件已见诸文献。感染控制措施要依靠隔离和控制VRE定植或感染的病人。尽管VRE定植的方式尚不清楚,但利用有效的方法快速鉴定病人定植或感染的VRE是非常必要的。

 

 

 

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