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日志

 
 

【分享】卡他莫拉菌(注意快速检测试验)  

2009-04-16 21:28:50|  分类: 细菌 |  标签: |举报 |字号 订阅

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细菌简介:

卡他莫拉菌(moraxella catarrhalis,MC)为革兰阴性双球菌,原属奈瑟菌属(Neisseria catarrhalis,NC),Catlin在1970年将此菌分类为布兰汉菌属(Branhamella Cararrhalis,BC),1984年在伯杰分类细菌学手册中被列为莫拉菌属的布兰汉亚属(Subgenus Branhamella)。MC上人类上呼吸道的常居菌种,为条件致病菌,该菌可引起人类的多种感染,可累及全身,国外资料显示,MC在成人下呼吸道感染及儿童肺炎、中耳炎等标本中的分离率,仅次于流感嗜血杆菌和肺炎链球菌列为第三位。

 

BAC 48H:

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BAC 3D:

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巧克力平皿: 48h

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MH 48h:(有点淡粉色)

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CA  3D:(继续培养显淡粉色)

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MH 3D:(产B内酰胺酶,但鉴定板上提示不产B内酰胺酶,不知道问题出在哪了。)

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革兰染色镜下:

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生化鉴定加试剂前:(PEN孔变黄为+,兰色为-。)

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生化鉴定加试剂后:(LAP+是此菌鉴定的关键)

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  补充微量管NO3试验:(+)

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bjyy老师有最简便、快速的鉴定方法,在此转贴:(感谢!)

1.DNA酶试验:在DNA琼脂平板上点种待检菌和阳性对照菌(葡萄球菌),过夜培养后加1N HCl,10分钟后观察结果,菌落周围出现透明区为阳性。

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下图中透明的是金黄色葡萄球菌标准菌株(DNA酶阳性),其它三株菌为待测革兰阴性球菌(DNA酶阴性):

菌落正面:

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菌落背面:

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2.乙酰酯酶试验:用3-乙酰吲哚纸片沾取待检菌落,3分钟内纸片变为蓝绿色,即为阳性。

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附(“乙酰吲哚”应用文章):

乙酰吲哚纸片法快速鉴定卡他莫拉菌

中华医学检验杂志 1999年第3期第22卷 论著

作者:杨秀华 刘小兰 尚彦 马春红 王金良

单位:300050 天津市公安医院检验科

  关键词: 卡他莫拉菌;吲哚类;细菌分型技术

  【摘要】 目的 寻求快速鉴定卡他莫拉菌的新方法。方法 以3-乙酰吲哚为底物用纸片法检测该菌的乙酸酯酶,生成吲哚酚,在有氧下成蓝色斑点。结果 检查171株卡他莫拉菌及其他菌182株,其敏感性100%,特异性81.2%。结论 本法是一种快速、准确鉴定卡他莫拉菌的简易方法。

Rapid identification of M. catarrhalis with 3-indoxy acetate on a paper disc

YANG Xiuhua, LIU Xiaolan, SHANG Yan, et al.

Tianjin Public Security Hospital, Tianjin 300050

  【Abstract】 Objective To develop a new method for identifying M.Catarrhalis.Method 3-indoxyl acetate as substract to detect acetase forming Indigo on the paper disc. It developed blue color spot when oxygen existed.Results 171 strains of M. catarrhalis and 182 strains of other bacteria were examined. The sensitivity of this method was 100%, and the specificity was 81.2%.Conclusion This method is rapid, accurate and simple for identifying M. catarrhalis.

  【Key words】 M.Catarrhalis  Indoles  Bacterial typing techniques

  卡他莫拉菌原属奈瑟菌属,1970年分类为布兰汉菌,1984年列为莫拉菌属的一个亚属。人类鼻咽部是该菌寄居部位。该菌可引起人类多种感染。如急性中耳炎、上颌窦炎和下呼吸道感染,亦可引起脑膜炎、心内膜炎、尿道炎,婴儿和儿童眼结膜炎、角膜炎和败血症[1,2]。该菌产生β-内酰胺酶的菌株渐多,为临床治疗带来一定困难。为此,快速鉴定临床标本中的卡它莫拉菌有重要的意义。我们依据该菌能产生乙酰酯酶的特点设计了纸片法快速鉴定,取得满意结果,现报告如下。

  材料与方法

  一、材料

  1.菌株来源:标准菌株由中国药品生物制品检定所菌种室供应;分离的353株菌来自临床标本。

  2.仪器:菌株鉴定用VITEK自动细菌鉴定仪。

  3.试剂:3-乙酰吲哚为Sigma公司产品;丙酮由天津化学试剂二厂生产。

  二、方法

  1.纸片制备:制备直径6 mm 、厚1 mm 的滤纸片100片,高压灭菌。

  2.底物制备:称取200 mg 3-乙酰吲哚,溶于2 ml分析纯的丙酮中备用。

  3.底物纸片制备:将已高压灭菌的滤纸片浸于3-乙酰吲哚丙酮液中,在室温下晾干密封在干燥的小瓶中,在4℃下能储存4个月。新鲜制备的纸片应无色,但当储存时间过长或多次打开小瓶使水凝聚于纸片时易失效。

  4.测试方法:于上述纸片上滴加1滴生理盐水,将纸片固定于玻片上。取血琼脂平皿上的待鉴定菌落涂在纸片上,记录时间,观察菌落颜色变化。如在室温下3分钟内出现蓝绿色为阳性反应。在同一玻片上可同时测3~4个菌株。

  结果

  1.试验条件:首先是选择底物浓度:用50、100、150 g/L 3种底物浓度的纸片,同时对5株卡他莫拉菌进行观察,底物浓度为100 g/L时,即可在1~3分钟呈蓝色斑点。其次是确定呈色时间:以50株卡他莫拉菌观察本法的呈色时间,1分钟显色者12%,2分钟显色者63%,3分钟可100%显色。

  2.本法鉴定结果:本试验对卡他莫拉菌的敏感性为100%,特异性为81.2%,即171株卡他莫拉菌100%阳性。近缘菌株脑膜炎奈瑟菌5株,淋病奈瑟菌10株均阴性。其他菌株白色念珠菌阳性者22/56,大肠埃希菌6/8,绿脓假单胞菌4/5,金黄色葡萄球菌2/4,表皮葡萄球菌2/3;其余腐生葡萄球菌2株、肺炎链球菌11株、四联球菌2株、甲类链球菌54株、肠球菌2株、丙链球菌2株、棒状杆菌2株、肺炎克雷伯菌5株、不动杆菌2株、枸橼酸杆菌2株、沙门菌2株、类酵母菌5株均阴性。

  讨论

  本试验以3-乙酰吲哚为底物快速鉴定卡他莫拉菌。经3分钟呈色,能快速区分卡他莫拉菌与其他革兰阴性、氧化酶阳性的双球菌。文献报道有利用丁酸酯酶,以吲哚酚丁酸盐作为底物的快速法[3],或以4-甲基伞形酮丁酸盐(MUB)为底物的试验法,以三丁酸甘油酯为底物的B.CAT CONFIRM法等[4]。MUB法是荧光反应,须依赖有效的紫外灯,且必须温育5~20分钟后才能出现结果[5]。B.CAT CONFIRM法是利用该菌能快速水解三丁酸酯成为丁酸,使pH降低,指示剂显色。操作较繁琐,需时较长,易出假阳性[6]。本法与MUB法和B.CAT CONFIRM法比较,更为简便和准确。经试验发现,乙酰酯酶并非卡他莫拉菌所特有,牛卡他莫拉菌和羊卡他莫拉菌也能产生阳性反应。但该菌不感染人类。此外,其他细菌,如绿脓假单胞菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、白色念珠菌,少数菌株也出现阳性反应。可通过菌落形态、涂片、染色、镜检,氧化酶、触酶等试验易于将其区分。本试验的灵敏性和特异性较高,是一种快速、准确、简易的鉴定卡他莫拉菌的手段。

 

 

 

 

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