注册 登录  
 加关注
   显示下一条  |  关闭
温馨提示!由于新浪微博认证机制调整,您的新浪微博帐号绑定已过期,请重新绑定!立即重新绑定新浪微博》  |  关闭

hampc168

microorganism

 
 
 

日志

 
 

【原创】我分离出的分枝杆菌  

2007-02-03 22:59:28|  分类: 细菌 |  标签: |举报 |字号 订阅

  下载LOFTER 我的照片书  |

    这是一株分离自一患者局部脓肿标本中的分枝杆菌,患者的脓肿同时做了需氧、厌氧的培养,若没有根据临床症状进行分枝杆菌培养(患者局部脓肿反复发作,常用抗生素治疗无效,发病于局部肌肉注射后,局部针眼形成溃疡孔,已有近3个月的病史。),恐怕这份标本要漏检了,通过此次培养,使我深深的意识到临床医生给我们提供的诊断及一些相关资料的重要性,与临床临床经常保持联系和沟通是我们微生物检验不可缺少的一部分。以往我们经常遇到一些肝脓疡、脓性胸水/腹水及其他一些脓穿刺液培养不出细菌的情况,对此我也常常烦恼,因为标本直接湿片镜检看到了细菌,而且增菌后也可以看到增菌瓶中液体混浊并产气,但转种就是不生长,最终也只能报告7天无菌生长,实际上内心难安。。。细菌培养是一个复杂的过程,培养基和培养环境的选择对我们的工作是一个考验,我希望在以后的工作中能多留意那些有生长现象而又转种不出细菌的标本,不轻易放走一个标本!!

这是送检的脓肿的标本:(血性、脓性)

【原创】我分离出的分枝杆菌 - hampc168 - hampc168

标本直接涂片,湿片镜检(卢戈碘液单染色):仔细观察,除了可以看到RBC/WBC外,还可以看到移动的杆菌,在镜下是有折光性的,调节光线即可看到透明有折光性的细菌。

【原创】我分离出的分枝杆菌 - hampc168 - hampc168

标本瑞吉氏染色:(见不到细菌)

【原创】我分离出的分枝杆菌 - hampc168 - hampc168

标本革兰染色:(见不到细菌,可能是推片不到位,我常常直接镜检看到细菌,但推片染色后却见不到菌,技术不到位?)

【原创】我分离出的分枝杆菌 - hampc168 - hampc168

标本抗酸染色:(看不到TB菌,可能推片不到位,或染色不到位。)【原创】我分离出的分枝杆菌 - hampc168 - hampc168

标本增菌瓶:(培养37度2D,液体明显均匀混浊。)

【原创】我分离出的分枝杆菌 - hampc168 - hampc168

标本增菌瓶培养几天后:(应该是有菌生长,且产生气体使液体培养基向上面,这里提示肯定有细菌生长,但转种BAC/MAC/CA于分别需氧和厌氧环境培养,但都不生长。)

【原创】我分离出的分枝杆菌 - hampc168 - hampc168

增菌液中培养物革兰染色镜下:48H培养物:(隐隐约约可以看到有形的细菌形态)【原创】我分离出的分枝杆菌 - hampc168 - hampc168

【原创】我分离出的分枝杆菌 - hampc168 - hampc168

【原创】我分离出的分枝杆菌 - hampc168 - hampc168

增菌瓶中几天后的培养物革兰染色镜下:(可以看到细菌形态)【原创】我分离出的分枝杆菌 - hampc168 - hampc168

可以看到细菌的分枝状,但在细菌培养(需氧、厌氧培养)不出的情况下不敢确认他们是细菌。【原创】我分离出的分枝杆菌 - hampc168 - hampc168

【原创】我分离出的分枝杆菌 - hampc168 - hampc168

标本在增菌的同时接种于罗氏培养基上,15天左右可以看到菌落形态:(这里的图片是培养19D的结果,淡黄色菌落)

【原创】我分离出的分枝杆菌 - hampc168 - hampc168

【原创】我分离出的分枝杆菌 - hampc168 - hampc168

【原创】我分离出的分枝杆菌 - hampc168 - hampc168

罗氏培养基上菌落抗酸染色镜下:(红色,阳性)

【原创】我分离出的分枝杆菌 - hampc168 - hampc168

【原创】我分离出的分枝杆菌 - hampc168 - hampc168

【原创】我分离出的分枝杆菌 - hampc168 - hampc168

【原创】我分离出的分枝杆菌 - hampc168 - hampc168

 附:常见分枝杆菌生物学特点和生化反应(此资料来自广州梅里埃的李老师,特别感谢!)

 

 

  生长 速度 生长温度25 42 45 硝酸盐还原 Tween80水解5D 10D 耐热触媒试验 烟酸试验 耐热磷酸酶试验 NaCL 耐受 试验 尿素酶
结核分枝杆菌 S   N -  -   - + -  V - + - - +
牛结核分枝杆菌 S   N -  -   - - -  V _ - - - +
非洲分枝杆菌 S   S -  -   - V -  V - V V - +
田鼠分枝杆菌 S   S V  -  - V -  + + - + - +
堪萨斯分枝杆菌 S   P +  +  - + +  + + - + - +
海鱼分枝杆菌 S   P +  V -- - +  +  V V  + - +
猿分枝杆菌 S   P +  +  - V -  V   + + -   +
亚洲分枝杆菌 S   P +  +  +  - -   -  -  - +   -
瘰癧分枝杆菌 S   S +  +  - V -  -   + - - - +
戈登分枝杆菌 S   S +  +  - - +  +   + - - - +
鸟分枝杆菌 S   N +  +  +  - -  - V - - - -
`分枝杆菌 S   N +  +  + - -  -  +  - - - -
溃疡分枝杆菌 S   N - -   - - -  - + _ - - -
胞内分枝杆菌 S   N +  +  V - -  - + - - - -
偶发分枝杆菌 R   N +  +  - + V  V + - + + +
龟分枝杆菌 R   N +  +  - - -  V V V + - +
脓肿分枝杆菌 R   N +  +  - - -  V V V + + +
耻垢分枝杆菌 R   N +  +  + + +  + +     +  
草分枝杆菌 R  S  +  +  + + +  + -      +  
耐热分枝杆菌 R  S  +  +  + + +  + + - - + +

S慢生长  R快速生长  S’暗产色  N不产色  +阳性 -阴性 V部分阳性 

生长时间试验:L-J培养基上,接种10-2  -10-3g/mL菌量,1周内形成菌落者为快速生长,1周以上形成菌落者为迟缓生长

暗产色试验:将分离培养的菌株传种2L-J培养基,1支用铝纸包紧,另一支不包,同时置37℃培养,待后者有菌落时打开前者铝纸,观察其菌落有无色素

耐热触酶试验:将L-J培养基上生长的菌落5 –10mg,加入0.067mol/LPH7.0 PB缓冲液0.5-1.0mL内,制备菌液。将菌液管置68℃水浴内保温20min,再冷至室温。沿菌液管壁徐徐加入30%H2O2  10%Tween80等量混合液0.5mL,勿摇动。

          结果:菌液内持续许多小气泡升起者为阳性,20分钟内无气泡产生者为阴性。

Tween80水解试验:将L-J培养基上生长3-4周的菌落5 –10mg,放入含中性红指示剂和PH7.0PB缓冲液的Tween80试剂管壁上,磨匀,制成菌悬液,放入37℃培养,第51020天观察结果:

          结果:培养液有琥珀色变成粉红色或紫红色者为阳性,不变色者为阴性。         

烟酸试验:试剂13%联苯胺乙醇溶液,棕色瓶密封,4℃保存

        试剂210%溴化氰溶液, 棕色瓶密封,4℃保存可用数日

        方法:将L-J培养基上生长3-4周的菌落加入灭菌大试管中,加入沸水1.5mL,震荡、静置15 –30min浸泡菌落。取上清液0.4mL分装2支试管,各2mL。然后加试剂1 0.1mL,其中一管再加试剂2  0.1mL,观察颜色变化。

         结果:加试剂1和试剂2的试管出现桃红色或红色沉淀为阳性;若2管均白色沉淀为阴性

耐热磷酸酶试验:将L-J培养基上生长2 –4周的菌落研磨成5 –10mg/mL菌悬液,取0.5mL置无菌小试管中,37℃水浴30min,冷却后加入0.2mol/L枸橼酸盐缓冲液0.5mL,再加入0.01mol/L磷酸苯二钠水溶液0.5mL37℃培养1小时,再依次加入0.5mol;/LNaOH 液、, 0.5mol;/LNaHCO3液、0.6%4-氨基安替比林和2.4%铁氰化钾液各0.5mL,混匀后观察结果

        结果:呈现红色-深红色者为阳性,淡黄色-无色者为阴性

    尿素酶试验:将L-J培养基上生长3 –4周的菌落5 –10mg/加入3mL尿素液内,配成菌悬液。加入0.1%酚红液1滴于菌悬液中,37℃培养3天,观察结果。

        结果:菌液由琥珀色变成粉红色者为阳性,不变色者为阴性(阴性结果要观察到第五天)

5%NaCL耐受试验:于灭菌前未凝固的L-J培养基100mL中加入NaCL5g,然后制成斜面。接种被检菌株37℃培养4周,观察生长情况。 

 以下发自2007.3.9:

此菌转种至BAC上培养了半个月,开始有菌生长,继续培养长出有皱褶的淡黄色菌落,经抗酸染色为阳性,其形态更接近液体增菌培养基里的细菌形态,由于抗酸菌难着色,所以革兰染色染成了阴性的。

下面传几张相关图片:BAC上培养1M的菌落形态: 

【原创】我分离出的分枝杆菌 - hampc168 - hampc168

BAC上菌落抗酸染色镜下:

【原创】我分离出的分枝杆菌 - hampc168 - hampc168

【原创】我分离出的分枝杆菌 - hampc168 - hampc168

【原创】我分离出的分枝杆菌 - hampc168 - hampc168

【原创】我分离出的分枝杆菌 - hampc168 - hampc168

此菌不产URE,经PCR鉴定:不是人型TB菌。

  评论这张
 
阅读(1860)| 评论(1)
推荐 转载

历史上的今天

评论

<#--最新日志,群博日志--> <#--推荐日志--> <#--引用记录--> <#--博主推荐--> <#--随机阅读--> <#--首页推荐--> <#--历史上的今天--> <#--被推荐日志--> <#--上一篇,下一篇--> <#-- 热度 --> <#-- 网易新闻广告 --> <#--右边模块结构--> <#--评论模块结构--> <#--引用模块结构--> <#--博主发起的投票-->
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

页脚

网易公司版权所有 ©1997-2017