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【转帖】血浆凝固酶阴性葡萄球菌快速两步鉴定方法

2006-10-12 22:06:36|  分类: 文章转载 |  标签: |举报 |字号 订阅

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    近年来使用医疗器械导致的感染,尤其是免疫缺陷患者的血浆凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)感染增多已引起重视,而常用鉴定法程序繁琐、费高耗材。我们参考Ieven等[1]建立的方法,仅用几种常用细菌生化试验与药敏试验组成的两步法,可将临床分离的86株CNS中的83株(96.5%)快速鉴定到种,报告如下。
  一、材料和方法
  1.菌株来源:86株CNS系临床标本中分离,包括从血液标本分离4株、静脉插管10株、呼吸道18株、伤口12株、泌尿道32株,其他标本10株。金黄色葡萄球菌(ATCC 25923)与表皮葡萄球菌(ATCC 12228)质控菌株由中国药品生物制品检定所提供。
  2.试剂:碱性磷酸酶试剂盒为上海长征公司产品;蕈糖、尿素、鸟氨酸脱羧酶生化试验管与新生霉素药敏纸片由浙江省军区后勤部卫生防疫所提供;磷霉素药敏纸片为法国生物梅里埃公司产品;厌氧硫乙醇酸盐肉汤用Brewer配方,液面加凡士林,灭菌后换无菌橡皮塞。
  3.菌株分离:除血液标本需增菌外,其余标本直接接种血平板,35℃培养18~24小时,部分延长至48~72小时。取可疑菌落经革兰染色为阳性球菌,无动力,触酶阳性,发酵(迟缓发酵)葡萄糖可判为葡萄球菌属。再与微球菌鉴别:葡萄球菌对呋喃唑酮(100 μg/片)敏感(>15 mm),对杆菌肽(0.04 U/片)耐药(沿纸片生长),而微球菌反之。
  4.CNS确定:血浆凝固酶试验按文献[2]操作。


附表 
血浆凝固酶阴性葡萄球菌两步法鉴定

菌 种 第一步 第二步

尿
碱性磷
酸酶
鸟氨酸
脱羧酶
新生
霉素
磷霉
厌氧
生长
表皮葡萄球菌 - + ± S +
溶血葡萄球菌 + - - - R
腐生葡萄球菌 + + - -
里昂葡萄球菌 + ± - +
施莱弗葡萄球菌 ± - +
人葡萄球菌 ± + - - S S -
头葡萄球菌 - - -
头葡萄球菌解尿亚种 - + - R
华纳葡萄球菌 + + - - S +
  +:阳性,-:阴性,S:敏感,R:不敏感

  5.CNS鉴定:尿素、鸟氨酸脱羧酶试验管接种细菌后用消毒液体石蜡覆盖;碱性磷酸酶试验按文献[3]进行。两步法鉴定与结果判定见附表。同时随机抽取已鉴定的表皮葡萄球菌与溶血葡萄球菌各10株、经双盲法用法国产VITEK全自动细菌鉴定系统(API 20A)进行复核。
  二、结果与讨论
  1.双盲法试验结果显示两步法对质控菌株鉴定符合率100.0%(n=8)。临床分离的86株CNS中,83株(96.5%)被鉴定到种,可基本满足基层临床检验工作的需要。本法已鉴定的20株再经VITEK专家系统复核符合率100.0%。
  2.本组83株CNS菌型分布:表皮葡萄球菌45株(54.2%),溶血葡萄球菌22株(26.5%),人葡萄球菌7株(8.4%),腐生葡萄球菌5株(6.0%),里昂葡萄球菌2株(2.4%),华纳与头葡萄球菌各1株(2.4%)。另2株木糖与1株松鼠葡萄球菌在本法中缺乏特有指标而采用其他生化特征确定。结果表明,表皮葡萄球菌是CNS感染的主要菌种。
  3.对第一步鉴定出现相似结果的菌株,可根据提示选用第二步鉴定程序以省时并减少消耗。不能用本法鉴定的科恩、木糖、松鼠、缓慢葡萄球菌在人体内感染极为少见,必要时可用氧化酶、木糖、甘露醇(糖)等并参考有关资料进行鉴定。
  4.尽管API 20 Staph, API 32 Staph等试剂盒性能优越,但对基层医院用其鉴定CNS来说费用较高,故难以广泛应用。因此,我们报道的两步法简捷、经济、快速可靠,有较高的实用价值,可促进对CNS的研究,并适合基层医院推广应用。

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