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【转贴】药敏试验质量控制

2006-09-12 22:24:06|  分类: 质控 |  标签: |举报 |字号 订阅

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1.K-B纸片扩散法药敏试验操作要求
(1)培养基选择:WHO推荐使用水解酪蛋白琼脂(MH)培养基,因其钙、镁离子含量适中且不含有与磺胺药物拮抗的物质,含磺胺药物的纸片的抑菌环不致受影响。检测肺炎链球菌敏感性时,要求在培养基中加入5%脱纤维羊血;检测嗜血杆菌及淋病奈瑟菌敏感性时,分别使用嗜血杆菌试验培养基(HTM)和GC琼脂基础+1%特定的生长补充品。要求琼脂平板厚度为4mm,pH(7.3±0.1)。
(2)含药纸片:必须经过质量鉴定。纸片要求酸碱度中性,直径6.35mm,含药纸片应低温保存,-20℃保存不超过1年,日常可取出1周用量存放于4℃冰箱。含药纸片应避免受潮,盛纸片的容器自冰箱或冰冻箱取出后,必须置室温1~2h后再打开取出纸片使用,以避免冷凝水浸湿纸片。含药纸片与平板边缘至少相距15mm,纸片与纸片间中心点至少相距24mm。含药纸片贴在琼脂上不得再移动,否则会因部分药液渗入琼脂而影响试验结果。
(3)接种菌量:从孵育18~24h的血平板培养物中,挑取4~5个菌落,制成0.5麦氏浊度的菌悬液。用棉拭子沾取菌悬液在M-H平板上依3个方向(转60°)涂划,以保证接种物均匀分布。
(4)孵育:接种菌液后,待琼脂表面水分稍干后,即按要求贴上含药纸片,15min内放入35℃孵箱孵育(检测肺炎链球菌、嗜血杆菌及淋病奈瑟菌敏感性的平板应放在5%~7%二氧化碳孵箱中孵育),平板最好单独摆放,重叠最多不能超过2个。孵育18~24h,读取结果。
(5)判定结果:用刻度尺或卡尺准确量取抑菌环直径。抑菌环直径以肉眼见不到细菌明显生长为限。如变形杆菌抑菌环内出现蔓延生长,磺胺类药物抑菌环内出现微量生长,均忽略不计。判读药敏试验结果应参考CLSI 最新公布的折点表。
2.药敏试验质控要求
(1)用质控菌株按标准方法与临床标本分离菌株同步进行药敏试验。
(2)更换药物或培养基时必须用相应质控菌株测试。
(3)三级医院每天用质控菌株进行常规监控,二级医院每周监测1次。每次测试结果应作记录。
(4)如出现抑菌环直径超出可接受范围,应从培养基、抗菌药物、接种浓度等方面寻找原因,并及时纠正。
3.试验药物的选择
在进行体外药敏试验时,应根据不同抗菌药物的特点和耐药谱,结合患者的临床特点选择试验药物,选择药物的基本原则如下:
(1)代表性:药敏试验所选药物应具有代表性及对同类药物有提示作用。
(2)预报性:选择合适的药物作药敏试验,可对抗菌药物使用有提示作用。如金黄色葡萄球菌对苯唑西林耐药提示对目前所有β-内酰胺类抗生素耐药;革兰阳性菌耐庆大霉素提示对氨基糖甙类耐药;克雷伯菌属及大肠埃希菌对头孢泊肟、头孢他啶或氨曲南耐药,提示菌株可能产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)。
(3)特殊性:选择感染部位有较高浓度的抗菌药物进行试验,有利于临床治疗。如尿路感染患者尿液标本中病原菌药敏试验可选用在泌尿道浓度较高的药物如硝基呋喃类的呋喃妥因;中枢神经系统感染患者脑脊液中病原菌药敏试验应选用能通过血脑屏障的药物,如氯霉素、头孢呋辛。
随着细菌耐药性日趋严重,多重耐药菌株不断出现。临床微生物学实验室应根据临床要求和实际情况,开展一些特殊的药敏试验, 如耐甲氧西林葡萄球菌(M RSA) 的检测,β-内酰胺酶及ESBLs 的检测,耐万古霉素肠球菌(V R E) 的检测等。
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